Ein allgemeiner Mechanismus der Photokonvertierung von grun-zu-rot fluoreszierenden Proteinen unter blauem und infrarotem Licht reduziert Phototoxität in der Einzelmolekulmikroskopie von lebenden Zellen

Photokonversion von fluoreszierenden Proteinen mithilfe von blauem und komplementärem nah-infraroten Licht, genannt "Primed Conversion" (PC), ist ein kurzlich fur Dendra2 entdeckter Mechanismus. Die Kontrolle uber die Konformation von Arginin an Position66 und Threonin an Position69 fluore...

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Published inAngewandte Chemie Vol. 129; no. 38; p. 11792
Main Authors Turkowyd, Bartosz, Balinovic, Alexander, Virant, David, GolzCarnero, Haruko G, Caldana, Fabienne, Endesfelder, Marc, Bourgeois, Dominique, Endesfelder, Ulrike
Format Journal Article
LanguageGerman
Published Weinheim Wiley Subscription Services, Inc 11.09.2017
Subjects
Chemistry
DNA-directed RNA polymerase
Ribonucleic acid
RNA
Rot
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Summary:Photokonversion von fluoreszierenden Proteinen mithilfe von blauem und komplementärem nah-infraroten Licht, genannt "Primed Conversion" (PC), ist ein kurzlich fur Dendra2 entdeckter Mechanismus. Die Kontrolle uber die Konformation von Arginin an Position66 und Threonin an Position69 fluoreszierender Proteine aus Anthozoa (Proteinfamilien Dendra2, mMaple, Eos, mKikGR, pcDronpa) ermöglicht in allgemeiner Weise PC. Mutationen von Alanin159 oder Serin173, die dafur bekannt sind, die Chromophorflexibilität zu beeinflussen und reversibles Photoschalten zu ermöglichen, verhindern PC. Eine verbesserte Photokonversion wurde fur pcDronpa-Varianten mit Asparagin116 beobachtet. Die reduzierte Phototoxizität bei der Anwendung von PC in der Einzelmolekul-Mikroskopie von lebenden Zellen wird demonstriert, und es werden Trajektorien der RNA-Polymerase-Dynamiken in Escherichia-coli-Zellen aufgezeichnet.
ISSN:0044-8249
1521-3757
DOI:10.1002/ange.201702870