沙门氏菌耐药基因检测芯片的构建

• Published in: Zhejiang daxue xue bao. Journal of Zhejiang University. Agriculture and life sciences. Nong ye yu sheng ming ke xue ban Vol. 32; no. 6; pp. 638 - 644
• Main Author: 马孟根 王红宁 余勇 张东 刘世贵
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 四川大学,生命科学学院,四川大学"985工程"西南资源环境与灾害防治科技创新平台,四川,成都,610064 2006; 四川省动物防疫监督总站,四川,成都610041%四川大学,生命科学学院,四川大学"985工程"西南资源环境与灾害防治科技创新平台,四川,成都,610064; 四川农业大学,动物科技学院,四川,雅安,625014%四川省动物防疫监督总站,四川,成都610041%四川大学,生命科学学院,四川大学"985工程"西南资源环境与灾害防治科技创新平台,四川,成都,610064
• Subjects: 基因芯片; 检测; 沙门氏菌; 耐药基因; 沙门氏菌; 耐药基因; 基因芯片; 检测
• ISSN: 1008-9209
• DOI: 10.3321/j.issn:1008-9209.2006.06.009

以氨基糖苷类、四环素类、磺胺类和氯霉素类四大类抗生素的11种耐药基因为靶基因，构建了耐药基因的检测芯片，确定芯片点样温度为25℃，湿度为65％；各样点中心距离为1000μm，样点直径为220μm．芯片点样结束后，室温干燥6h，60℃水合处理30s，80℃干燥10s，254nm波长紫外交联10min．以532nm（绿光）波长扫描采集杂交信号，激光扫描分辨率为10μm，激光功能90％，PMTG85％．选用tetA基因进行杂交动力学研究，确定靶基因的点样浓度为100ng·μL^-1，探针最适浓度为3600pg·μL^-1，系统检测灵敏度为3pg·μL^-1．基因芯片杂交的主要参数为：44℃预杂交2h，52℃杂交6h，杂交信号的判读标准为：样点信噪比（S／N）≥1．5及信号强度中位值≥1000．芯片杂交特异性高，重复性好，实现了11种耐药基因的同时检测。