芽孢杆菌植酸酶基因在毕赤酵母中的分泌表达

根据枯草芽孢杆菌WHNB02植酸酶phyC基因全序列设计一对引物，采用PCR法从舍有该基因的pUC18-phyC正质粒上获得不舍有信号肽序列的肋正基因表达片段，亚克隆到毕赤巴斯德表达栽体pPIC9K的多克隆位点，并电转化毕赤巴斯德酵母GS115．经MD和MM平板筛选、酶活性测定，获得了阳性转化子PP9KC．首次在毕赤巴斯德酵母中实现了有生物学活性芽孢杆菌植酸酶的分泌表达，去糖基化试验表明该植酸酶的分子量为53．5kD和50．9kD糖基化程度不同的两种糖蛋白．用麦芽汁半合成培养基对PP9KC进行诱导培养，培养48h后酶活可达到2453U／mL，表达量为出发菌株的10．5倍、酶学性质分析表明，其酶...

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Published inZhejiang daxue xue bao. Journal of Zhejiang University. Agriculture and life sciences. Nong ye yu sheng ming ke xue ban Vol. 31; no. 5; pp. 621 - 627
Main Author 王红宁 吴琦 赵海霞 陈惠 柳萍
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 2005
Subjects
分泌表达
植酸酶
毕赤巴斯德酵母
芽孢杆菌
芽孢杆菌
分泌表达
植酸酶
毕赤巴斯德酵母
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ISSN1008-9209

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Summary:根据枯草芽孢杆菌WHNB02植酸酶phyC基因全序列设计一对引物，采用PCR法从舍有该基因的pUC18-phyC正质粒上获得不舍有信号肽序列的肋正基因表达片段，亚克隆到毕赤巴斯德表达栽体pPIC9K的多克隆位点，并电转化毕赤巴斯德酵母GS115．经MD和MM平板筛选、酶活性测定，获得了阳性转化子PP9KC．首次在毕赤巴斯德酵母中实现了有生物学活性芽孢杆菌植酸酶的分泌表达，去糖基化试验表明该植酸酶的分子量为53．5kD和50．9kD糖基化程度不同的两种糖蛋白．用麦芽汁半合成培养基对PP9KC进行诱导培养，培养48h后酶活可达到2453U／mL，表达量为出发菌株的10．5倍、酶学性质分析表明，其酶促反应最适pH值为7．0，最适反应温度为65℃，经90℃处理10min，残留酶活性为37℃时的78．2％．
Bibliography:Bacillus; phytase; Pichia pastoris ; secretory expression
phytase
Q939.124
secretory expression
Q556.1
Bacillus
33-1247/S
Pichia pastoris
ISSN:1008-9209