定点突变法显示在高龄SHR大鼠心脏组织中KCNE2第98位氨基酸可能存在磷酸化修饰

Q946.1; 目的:探究在高龄SHR大鼠心室膜蛋白中,KCNE2蛋白是否发生了磷酸化修饰.方法:用碱性磷酸酶处理高龄SHR大鼠心室膜蛋白,以抗KCNE2的抗体(Ab2)为一抗进行免疫印迹;将在蛋白离体系统中翻译出的含c-myc的KCNE2融合蛋白经碱性磷酸酶处理后,分别以Ab2和抗c-myc的抗体为一抗的免疫印迹;以及一系列的c-myc-hKCNE2的单点(KCNE2Y96F和KCNE2S98A)和双点突变(KCNE2Y96F/S98A)实验.结果:高龄SHR大鼠心室膜蛋白样品经碱性磷酸酶处理后,极大地减弱了Ab2对KCNE2蛋白的识别能力;另外,蛋白离体系统中翻译出的含c-myc的KCNE...

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Published in浙江大学学报（医学版） Vol. 36; no. 4; pp. 364 - 370
Main Authors 王慧莲, 吕社民, 宁启兰, 杨旭东, 韩燕, 钟波, Gea-Ny TSENG
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 西安交通大学医学院遗传与分子生物学系,陕西,西安,710061 2007
佛吉尼亚联邦大学生理学系,美国,Richmond,VA,23298%西安交通大学医学院遗传与分子生物学系,陕西,西安,710061%佛吉尼亚联邦大学生理学系,美国,Richmond,VA,23298
Subjects
心脏
KCNE2蛋白
Q-T延长综合征
大鼠,近交SHR
点突变
钾通道
磷酸化
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ISSN1008-9292
DOI10.3785/j.issn.1008-9292.2007.04.010

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Summary:Q946.1; 目的:探究在高龄SHR大鼠心室膜蛋白中,KCNE2蛋白是否发生了磷酸化修饰.方法:用碱性磷酸酶处理高龄SHR大鼠心室膜蛋白,以抗KCNE2的抗体(Ab2)为一抗进行免疫印迹;将在蛋白离体系统中翻译出的含c-myc的KCNE2融合蛋白经碱性磷酸酶处理后,分别以Ab2和抗c-myc的抗体为一抗的免疫印迹;以及一系列的c-myc-hKCNE2的单点(KCNE2Y96F和KCNE2S98A)和双点突变(KCNE2Y96F/S98A)实验.结果:高龄SHR大鼠心室膜蛋白样品经碱性磷酸酶处理后,极大地减弱了Ab2对KCNE2蛋白的识别能力;另外,蛋白离体系统中翻译出的含c-myc的KCNE2融合蛋白经碱性磷酸酶处理后,虽然极大地减弱了Ab2对其融合蛋白的识别能力,却没有影响抗c-myc抗体对KCNE2融合蛋白的识别能力.定点突变的结果显示,虽然以抗c-myc抗体为一抗的免疫印迹结果显示,蛋白质离体翻译系统成功地翻译出了单突变子KCNE2S96A及双突变子KCNE2Y96F/S98A蛋白,但不论样品被碱性磷酸酶处理与否,Ab2在这些样品中均检测出很弱的KCNE2蛋白免疫条带.结论:在高龄SHR大鼠心室组织中,KCNE2第98位丝氨酸可能发生了磷酸化修饰.然而该位点的磷酸化修饰是否会通过影响心脏的电生理,而在SHR大鼠心脏病变过程中起着一定的作用,有待于从电生理的水平上进一步研究.
ISSN:1008-9292
DOI:10.3785/j.issn.1008-9292.2007.04.010