猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白单克隆抗体制备与鉴定

根据NSP9非结构蛋白参数选取相应30 bp DNA片段,片段串联后人工合成并连接p ET-28a（＋）载体,大肠杆菌BL21中表达得到可溶蛋白,镍柱亲和层析纯化后免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞骨髓瘤细胞融合。细胞融合后利用间接ELISA法杂交瘤细胞阳性克隆筛选,2次亚克隆后共获得3株抗PRRSV NSP9单克隆抗体,命名为3B17、3J13、3F19。这3株单抗可与大肠杆菌表达的蛋白产物和PRRSV感染的Marc-145细胞发生特异性反应。在PRRSV感染的Marc-145细胞中,NSP9蛋白表达水平接毒后不断升高,48 h达最高,为深入研究NSP9功能奠定基础。...

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Published in东北农业大学学报 Vol. 47; no. 7; pp. 63 - 69
Main Author 赵孟孟 张二芹 冯松林 郭依嘉 阮海宇 王文佳 邢星 张桂红
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 华南农业大学兽医学院,国家生猪种业工程技术研究中心,广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室,广州510642 2016
河南农业大学牧医工程学院,郑州450002%河南农业大学牧医工程学院,郑州,450002%华南农业大学兽医学院,国家生猪种业工程技术研究中心,广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室,广州510642%河南牧业经济学院制药工程学院,郑州,450046%广西钦州保税港区出入境检验检疫局,广西钦州,535008
Subjects
NSP9
单克隆抗体
杂交瘤
猪繁殖与呼吸综合征病毒
猪繁殖与呼吸综合征病毒
NSP9
hybridoma
单克隆抗体
PRRSV
杂交瘤
monoclonal antibodies
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Summary:根据NSP9非结构蛋白参数选取相应30 bp DNA片段,片段串联后人工合成并连接p ET-28a（＋）载体,大肠杆菌BL21中表达得到可溶蛋白,镍柱亲和层析纯化后免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞骨髓瘤细胞融合。细胞融合后利用间接ELISA法杂交瘤细胞阳性克隆筛选,2次亚克隆后共获得3株抗PRRSV NSP9单克隆抗体,命名为3B17、3J13、3F19。这3株单抗可与大肠杆菌表达的蛋白产物和PRRSV感染的Marc-145细胞发生特异性反应。在PRRSV感染的Marc-145细胞中,NSP9蛋白表达水平接毒后不断升高,48 h达最高,为深入研究NSP9功能奠定基础。
Bibliography:PRRSV; NSP9; monocional antibodies; hybridoma
23-1391/S
ZHAO Mengmeng, ZHANG Erqin, FENG Songlin, GUO Yijia, RUAN Haiyu, WANG Wenjia, XlNG Xing, ZHANG Guihong（1. Key Laboratory of Zoonosis Prevention and Control of Guangdong Province, National Engineering Research Center for Breeing Swine Industry, School of Veterinary, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China; 2. School of Animal Science and Veterinary Medicin, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China; 3. School of Pharmaceutical Engineering, Henan University of Animal Husbandry and Economy, Zhengzhou 450046, China; 4. Guangxi Qinzhou Free Trade Port Area Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau, Qinzhou Guangxi 535008, China）
In order to generate monoclonal antibody against the NSP9 protein of PRRSV, the NSP9 protein was expressed in Escherichia coli and subsequently used as an antigen to immunize mice and for the initial screening of hybridomas prepared from the mice for their ability to produce anti NSP9 protein Mabs via
ISSN:1005-9369