免疫渗滤法实验中非特异性染色封闭方法的改进

• Published in: Xi'an jiao tong da xue xue bao. Journal of Xi'an Jiaotong University (medical sciences). Yi xue ban Vol. 31; no. 1; pp. 122 - 124
• Main Author: 来宝长 谭武红 安静 郑瑾 王一理
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 西安交通大学生物医学信息工程教育部重点实验室、生命科学与技术学院癌症研究所,陕西西安,710061 2010; 西安交通大学医学院公共卫生系,陕西西安,710061%西安交通大学医学院公共卫生系,陕西西安,710061%西安联尔科技有限公司,陕西西安,710077%西安交通大学生物医学信息工程教育部重点实验室、生命科学与技术学院癌症研究所,陕西西安,710061
• Subjects: 16; 人乳头瘤病毒16型（HPV; 免疫渗滤法; 非特异性染色封闭方法; 人乳头瘤病毒16型(HPV16); non-specific staining blocking method; 非特异性染色封闭方法; human papillomavirus type 16; immuno-infiltration; 免疫渗滤法
• ISSN: 1671-8259

目的选择理想的非特异性抗原封闭方法以适应基于免疫渗滤法的蛋白芯片制备。方法以杆状病毒-昆虫表达系统制备的人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白抗原为例,采用脱脂奶粉、小牛血清、牛血清白蛋白及不同组合等5种方法对非特异性抗原进行封闭,检测其在免疫渗滤实验中对消除非特异性染色的效果,寻找最佳封闭非特异性染色的方法。结果经过多次重复试验,并以PBS代替血清作空白试验,结果显示,目前常用的先固相然后封闭的几种方法,其封闭效果的稳定性和重复性不佳,且空白对照易出现假阳性;同时发现使用脱脂奶粉做封闭剂封闭后,由于奶粉颗粒易堵塞NC膜的孔径,影响NC膜的渗滤速度;使用小牛血清做封闭剂封闭后,由于NC膜对小牛血清的吸附而产生背景,影响结果判读;而采用20 g/L BSA先封闭后固相的方法,在实验中得到满意的结果。结论先封闭后固相的方法,在免疫渗滤实验中对非特异性抗原封闭的效果理想、结果稳定、重复性好,为一种理想的新的封闭方法。