密码子优化的猪瘟病毒荧光抗体的表达及初步应用

[目的]本文旨在研究大肠杆菌表达的猪瘟病毒（CSFV）荧光抗体用于病毒直接免疫荧光检测的可行性。[方法]在基因水平上对编码猪瘟病毒纳米抗体（VHH）与绿色荧光蛋白（EGFP）的融合基因进行密码子优化,优化后的融合基因插入p ET32a（＋）载体并在大肠杆菌BL21（DE3）中融合表达。表达的融合蛋白经过SDS-PAGE、Western blot进行表达及可溶性鉴定。利用镍柱亲和层析获得纯化的重组蛋白,经浓缩后用于猪瘟病毒直接免疫荧光检测并与CSFV间接免疫荧光试验进行效果比较,将该荧光抗体孵育CSFV、伪狂犬病病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）和猪圆环病毒2型（PCV-2）感染的PK15细胞...

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Published in南京农业大学学报 Vol. 40; no. 2; pp. 295 - 301
Main Author 何辉 乔绪稳 陈瑾 于晓明 张元鹏 侯继波 郑其升 孙卫东
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014%国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京,210014%南京农业大学动物医学院,江苏南京,210095 2017
南京农业大学动物医学院,江苏南京210095
Subjects
CSFV
原核表达
直接免疫荧光
荧光抗体
直接免疫荧光
原核表达
荧光抗体
fluorescent antibody
Classical swine fever virus (CSFV)
prokaryotic expression
CSFV
direct immunofluorescence assays
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ISSN1000-2030
DOI10.7685/jnau.201605030

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Summary:[目的]本文旨在研究大肠杆菌表达的猪瘟病毒（CSFV）荧光抗体用于病毒直接免疫荧光检测的可行性。[方法]在基因水平上对编码猪瘟病毒纳米抗体（VHH）与绿色荧光蛋白（EGFP）的融合基因进行密码子优化,优化后的融合基因插入p ET32a（＋）载体并在大肠杆菌BL21（DE3）中融合表达。表达的融合蛋白经过SDS-PAGE、Western blot进行表达及可溶性鉴定。利用镍柱亲和层析获得纯化的重组蛋白,经浓缩后用于猪瘟病毒直接免疫荧光检测并与CSFV间接免疫荧光试验进行效果比较,将该荧光抗体孵育CSFV、伪狂犬病病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）和猪圆环病毒2型（PCV-2）感染的PK15细胞从而鉴定荧光抗体的特异性。[结果]SDS-PAGE结果表明荧光抗体在大肠杆菌中实现部分可溶性表达。特异性试验结果表明,只有接种CSFV的PK15细胞组出现明显的绿色荧光,而其他组不出现或只出现少量非特异性荧光。与用商品化单抗建立的间接免疫荧光试验结果相比,该荧光抗体建立的直接免疫荧光方法具有更强的清晰度。[结论]猪瘟荧光抗体可在大肠杆菌中高效表达,纯化后的抗体具有良好的特异性,且该抗体具有生产操作简单、制备周期短和成本低等特点。
Bibliography:HE Hui1,2, QIAO Xuwen2, CHEN Jin2, YU Xiaoming2, ZHANG Yuanpeng2, HOU Jibo2 ,ZHENG Qisheng2 , SUN Weidong1. （ 1. College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China; 2.National Research Center of Veterinary Biological Engineering and Technology, Nanjing 210014, China）
32-1148/S
Classical swine fever virus （CSFV） ; fluorescent antibody ; prokaryotic expression ; direct immunofluorescence assays
[Objectives] The objective of this project is to determined whether the recombinant fluorescent antibody expressed in Escherichia coli can be used to detect Classical swine fever virus （CSFV）in direct immune fluorescence assay.[Methods] The gene VHH-EGFP synthesized according to condon usage of E.coli was cloned into pET32a（＋） and then transformed into E.coli BL21 （DE3）.The recombinant cells were cultured in LB （containing 50 μg＆#183; mL-1 of ampicillin）and incubated in 37 ℃ until A600 =0.6-0.8,then the target gene was induced with 0.4 mmol＆#183; L-1 IPTG for 24 h at 15 ℃.The induced bact
ISSN:1000-2030
DOI:10.7685/jnau.201605030