脾络氨酸激酶-核因子κB调控口腔癌相关巨噬细胞中癌痛相关环氧化酶2的机制研究

目的 通过体外原代巨噬细胞诱导以及分子生物学的方法,探究口腔癌相关巨噬细胞环氧化酶2（COX-2）上调的机制。方法 构建小鼠原代巨噬细胞,使用Cal27条件培养基（CM）刺激诱导形成口腔癌相关巨噬细胞,使用免疫荧光检测原代巨噬细胞的纯度。使用小分子抑制剂分别抑制脾络氨酸激酶（Syk）及核因子κB（NFκB）通路。使用实时定量聚合酶链反应（PCR）、Western blot检测COX-2及信号通路相关蛋白的变化。结果 所诱导的原代巨噬细胞均特异性表达CD68蛋白。Cal27 CM刺激能够显著提高COX-2的表达（P〈0.001）;抑制Syk的磷酸化即能够进一步抑制NFκB-P65的磷酸化,从而导...

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Published in华西口腔医学杂志 Vol. 34; no. 5; pp. 454 - 458
Main Author 林洁 王淼 吉阳 刘乐 高攀 李春洁
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 口腔疾病研究国家重点实验室华西口腔医院口腔麻醉科(四川大学),成都,610041%口腔疾病研究国家重点实验室华西口腔医院头颈肿瘤外科(四川大学),成都,610041 2016
Subjects
口腔癌
巨噬细胞
环氧化酶2
癌痛
口腔癌
cancer pain
癌痛
mouth neoplasm
cyclooxygenase-2
巨噬细胞
macrophage
环氧化酶2
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ISSN1000-1182
DOI10.7518/hxkq.2016.05.004

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Summary:目的 通过体外原代巨噬细胞诱导以及分子生物学的方法,探究口腔癌相关巨噬细胞环氧化酶2（COX-2）上调的机制。方法 构建小鼠原代巨噬细胞,使用Cal27条件培养基（CM）刺激诱导形成口腔癌相关巨噬细胞,使用免疫荧光检测原代巨噬细胞的纯度。使用小分子抑制剂分别抑制脾络氨酸激酶（Syk）及核因子κB（NFκB）通路。使用实时定量聚合酶链反应（PCR）、Western blot检测COX-2及信号通路相关蛋白的变化。结果 所诱导的原代巨噬细胞均特异性表达CD68蛋白。Cal27 CM刺激能够显著提高COX-2的表达（P〈0.001）;抑制Syk的磷酸化即能够进一步抑制NFκB-P65的磷酸化,从而导致COX-2的表达显著降低（P〈0.01）;而抑制NFκB-P65的磷酸化不能抑制Syk的磷酸化但可以显著降低COX-2的表达（P〈0.01）。结论 Syk-NFκB信号通路导致COX-2在口腔癌相关的巨噬细胞中高表达,靶定该信号通路可能是控制口腔癌相关癌痛的新方向。
Bibliography:Objective This study explores the mechanism of cyclooxygenase-2 （COX-2） upregulation in oral cancers associated with macrophage by using molecular biology techniques and primary culture of murine macrophage. Methods Murine macrophage was induced by macrophage colony-stimulating factor （M-CSF） and Ca127 conditional medium （CM）. Purity of the macrophage was detected through CD68 immunofluorescence staining. Inhibitors of spleen tyrosine kinase （Syk） and nuclear factor κB （NFκB） were used to inhibit these pathways. In addition, real-time polymerase chain reaction and Western blot analysis were used to detect alterations in COX-2 and pathway-related proteins. Results All of the induced cells speci- fically expressed CD68. Cal27 CM could significantly induce COX-2 expression （P〈0.001）. Moreover, inhibition of Syk pathway attenuated NFκB-P65 phosphorylation and reduced COX-2 expression （P〈0.01）, and inhibition of NFB pathway exerted no effects on Syk phosphorylation but significantly inhibited COX-2 upregulation （P
ISSN:1000-1182
DOI:10.7518/hxkq.2016.05.004