人白介素24cDNA克隆、突变纠正和原核表达

目的 获取人白介素24（IL-24）cDNA，构建原核表达载体以表达含有谷胱甘肽S转移酶（GST）的融合蛋白GST-IL-24。方法 以人外周血单核细胞（PBMC）总RNA为模板，RT-PCR扩增IL-24cDNA，克隆入原核表达载体pGEX-4T-2，测序结果显示在IL-24cDNA第223位G→A，370位T→C，从而导致其编码蛋白的氨基酸发生改变：A75T，H124Y，通过二次PCR将其纠正，重组载体pGEX-IL-24转化大肠杆菌BL21（DE3），异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，SDS-PAGE，Western blot检测显示有融合蛋白GST-IL-24表达。结果...

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Published inXi'an jiao tong da xue xue bao. Journal of Xi'an Jiaotong University (medical sciences). Yi xue ban Vol. 28; no. 2; pp. 130 - 133
Main Author 魏丽丽 李成华 袁成福 陈济 丁嵩涛 刘革力 易发平 宋方洲
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 重庆医科大学,生物化学和分子生物学教研室,重庆,400016%重庆医科大学,生物化学和分子生物学教研室,重庆,400016 2007
重庆医科大学,教育部临床检验诊断学重点实验室,重庆,400016
Subjects
二次PCR
克隆
原核表达
白介素24
突变纠正
融合蛋白
突变纠正
二次PCR
克隆
白介素24
原核表达
融合蛋白
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ISSN1671-8259
DOI10.3969/j.issn.1671-8259.2007.02.004

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Summary:目的 获取人白介素24（IL-24）cDNA，构建原核表达载体以表达含有谷胱甘肽S转移酶（GST）的融合蛋白GST-IL-24。方法 以人外周血单核细胞（PBMC）总RNA为模板，RT-PCR扩增IL-24cDNA，克隆入原核表达载体pGEX-4T-2，测序结果显示在IL-24cDNA第223位G→A，370位T→C，从而导致其编码蛋白的氨基酸发生改变：A75T，H124Y，通过二次PCR将其纠正，重组载体pGEX-IL-24转化大肠杆菌BL21（DE3），异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，SDS-PAGE，Western blot检测显示有融合蛋白GST-IL-24表达。结果 通过RT-PCR及二次PCR得到人IL-24cDNA，构建其原核表达载体，经IPTG诱导在相对分子量约为50000处有融合蛋白表达。结论 IL-24的重组载体在大肠杆菌BL21（DE3）可以表达GST—IL-24融合蛋白。
Bibliography:fusion protein
mutation correction
interleukin-24 （IL-24）
R730.5
two-step PCR
interleukin-24 （IL-24）; two-step PCR; mutation correction; fusion protein; cloning; prokaryotic expression
prokaryotic expression
cloning
61-1399/R
ISSN:1671-8259
DOI:10.3969/j.issn.1671-8259.2007.02.004