脑源性神经营养因子融合蛋白真核表达质粒的构建及表达
目的构建以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）为报告基因的脑源性神经营养因子（BDNF）融合蛋白真核表达质粒，并对其表达和定位进行研究。方法以人血白细胞DNA为模板，利用一对删除终止密码子的引物进行PCR获得BDNF基因片段，并将其与pEGFP—N1质粒载体连接，构建BDNF-EGFP融合蛋白真核表达质粒。以脂质体Lipofectamine2000转染Hela细胞，提取总RNA，通过RT—PCR方法检测BDNF-EGFP在转录水平的表达，Western blot及荧光显微镜进一步观察融合蛋白的表达定位。结果酶切和PCR鉴定证实BDNF基因片段正确克隆入载体质粒中，转染Hela细胞后，RT—PCR证实...
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| Published in | Xi'an jiao tong da xue xue bao. Journal of Xi'an Jiaotong University (medical sciences). Yi xue ban Vol. 30; no. 2; pp. 141 - 144 |
|---|---|
| Main Author | |
| Format | Journal Article |
| Language | Chinese |
| Published |
西安交通大学学院,神经生物学研究所,陕西西安,710061
2009
西安交通大学学院,第二附属医院麻醉科,陕西西安,710004%西安交通大学学院,,神经生物学研究所,陕西西安,710061 西安交通大学学院,第一附属医院中心ICU,陕西西安,710061%西安交通大学学院,神经生物学研究所,陕西西安,710004 |
| Subjects | |
| Online Access | Get full text |
| ISSN | 1671-8259 |
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| Abstract | 目的构建以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）为报告基因的脑源性神经营养因子（BDNF）融合蛋白真核表达质粒，并对其表达和定位进行研究。方法以人血白细胞DNA为模板，利用一对删除终止密码子的引物进行PCR获得BDNF基因片段，并将其与pEGFP—N1质粒载体连接，构建BDNF-EGFP融合蛋白真核表达质粒。以脂质体Lipofectamine2000转染Hela细胞，提取总RNA，通过RT—PCR方法检测BDNF-EGFP在转录水平的表达，Western blot及荧光显微镜进一步观察融合蛋白的表达定位。结果酶切和PCR鉴定证实BDNF基因片段正确克隆入载体质粒中，转染Hela细胞后，RT—PCR证实BDNF-EGFP融合蛋白在转录水平有表达，荧光显微镜观察显示BDNF-EGFP融合蛋白主要分布于细胞质中，Western blot结果显示Hela细胞培养液中有BDNF-EGFP融合蛋白存在。结论成功构建了BDNF-EGFP融合蛋白真核细胞表达质粒，BDNF-EGFP融合蛋白能够在Hela细胞中表达，主要位于细胞质中并可以分泌到细胞外。 |
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| AbstractList | 目的构建以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）为报告基因的脑源性神经营养因子（BDNF）融合蛋白真核表达质粒，并对其表达和定位进行研究。方法以人血白细胞DNA为模板，利用一对删除终止密码子的引物进行PCR获得BDNF基因片段，并将其与pEGFP—N1质粒载体连接，构建BDNF-EGFP融合蛋白真核表达质粒。以脂质体Lipofectamine2000转染Hela细胞，提取总RNA，通过RT—PCR方法检测BDNF-EGFP在转录水平的表达，Western blot及荧光显微镜进一步观察融合蛋白的表达定位。结果酶切和PCR鉴定证实BDNF基因片段正确克隆入载体质粒中，转染Hela细胞后，RT—PCR证实BDNF-EGFP融合蛋白在转录水平有表达，荧光显微镜观察显示BDNF-EGFP融合蛋白主要分布于细胞质中，Western blot结果显示Hela细胞培养液中有BDNF-EGFP融合蛋白存在。结论成功构建了BDNF-EGFP融合蛋白真核细胞表达质粒，BDNF-EGFP融合蛋白能够在Hela细胞中表达，主要位于细胞质中并可以分泌到细胞外。 Q78; 目的 构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因的脑源性神经营养因子(BDNF)融合蛋白真核表达质粒,并对其表达和定位进行研究.方法 以人血白细胞DNA为模板,利用一对删除终止密码子的引物进行PCR获得BDNF基因片段,并将其与pEGFP-N1质粒载体连接,构建BDNF-EGFP融合蛋白真核表达质粒.以脂质体Lipofectamine2000 转染Hela细胞,提取总RNA,通过RT-PCR方法检测BDNF-EGFP在转录水平的表达,Western blot 及荧光显微镜进一步观察融合蛋白的表达定位.结果 酶切和PCR鉴定证实BDNF基因片段正确克隆入载体质粒中,转染Hela细胞后,RT PCR证实BDNF EGFP融合蛋白在转录水平有表达,荧光显微镜观察显示BDNF EGFP融合蛋白主要分布于细胞质中,Western blot结果显示Hela细胞培养液中有BDNF EGFP融合蛋白存在. 结论成功构建了BDNF EGFP融合蛋白真核细胞表达质粒,BDNF EGFP融合蛋白能够在Hela细胞中表达,主要位于细胞质中并可以分泌到细胞外. |
| Author | 石秦东 张蓬勃 田玉梅 张军峰 陈新林 刘勇 |
| AuthorAffiliation | 西安交通大学医学院神经生物学研究所,陕西西安710061 西安交通大学医学院第一附属医院中心ICU,陕西西安710061 西安交通大学医学院第二附属医院麻醉科,陕西西安710004 |
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| Author_FL | ZHANG Jun-feng SHI Qin-dong ZHANG Peng-bo TIAN Yu-mei LIU Yong CHEN Xin-lin |
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| PublicationTitle | Xi'an jiao tong da xue xue bao. Journal of Xi'an Jiaotong University (medical sciences). Yi xue ban |
| PublicationTitleAlternate | Journal of Xi‘an Jiaotong University:Medical Sciences |
| PublicationTitle_FL | JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES) |
| PublicationYear | 2009 |
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| SourceID | wanfang chongqing |
| SourceType | Aggregation Database Publisher |
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| SubjectTerms | Hela细胞 绿色荧光蛋白 脑源性神经营养因子 融合蛋白 |
| Title | 脑源性神经营养因子融合蛋白真核表达质粒的构建及表达 |
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