脑源性神经营养因子融合蛋白真核表达质粒的构建及表达

• Published in: Xi'an jiao tong da xue xue bao. Journal of Xi'an Jiaotong University (medical sciences). Yi xue ban Vol. 30; no. 2; pp. 141 - 144
• Main Author: 石秦东 张蓬勃 田玉梅 张军峰 陈新林 刘勇
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 西安交通大学学院,神经生物学研究所,陕西西安,710061 2009; 西安交通大学学院,第二附属医院麻醉科,陕西西安,710004%西安交通大学学院,,神经生物学研究所,陕西西安,710061; 西安交通大学学院,第一附属医院中心ICU,陕西西安,710061%西安交通大学学院,神经生物学研究所,陕西西安,710004
• Subjects: Hela细胞; 绿色荧光蛋白; 脑源性神经营养因子; 融合蛋白; 脑源性神经营养因子; 绿色荧光蛋白; Hela细胞; 融合蛋白
• ISSN: 1671-8259

目的构建以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）为报告基因的脑源性神经营养因子（BDNF）融合蛋白真核表达质粒，并对其表达和定位进行研究。方法以人血白细胞DNA为模板，利用一对删除终止密码子的引物进行PCR获得BDNF基因片段，并将其与pEGFP—N1质粒载体连接，构建BDNF-EGFP融合蛋白真核表达质粒。以脂质体Lipofectamine2000转染Hela细胞，提取总RNA，通过RT—PCR方法检测BDNF-EGFP在转录水平的表达，Western blot及荧光显微镜进一步观察融合蛋白的表达定位。结果酶切和PCR鉴定证实BDNF基因片段正确克隆入载体质粒中，转染Hela细胞后，RT—PCR证实BDNF-EGFP融合蛋白在转录水平有表达，荧光显微镜观察显示BDNF-EGFP融合蛋白主要分布于细胞质中，Western blot结果显示Hela细胞培养液中有BDNF-EGFP融合蛋白存在。结论成功构建了BDNF-EGFP融合蛋白真核细胞表达质粒，BDNF-EGFP融合蛋白能够在Hela细胞中表达，主要位于细胞质中并可以分泌到细胞外。