猪FAM213B基因mRNA和启动子的克隆及序列分析

【目的】获得猪FAM213B基因完整mRNA和启动子序列，研究猪FAM213B基因表达，为探讨母猪妊娠的建立和胚胎发育调控机制奠定基础。【方法】通过5′RACE和3′RACE技术，获得基因完整mRNA序列，分析不同物种该基因氨基酸序列相似性；通过PCR克隆启动子区，并通过双荧光素酶报告基因载体系统转染猪子宫内膜细胞，研究其转录活性。【结果】猪FAM213B基因mRNA全长808 bp，其中5′UTR、CDS区和3′UTR长度分别为67、 609（含终止密码子）和132 bp（不含poly A序列），在17-106位氨基酸之间存在硫氧还蛋白折叠结构域；与猪FAM213B基因其他2个潜在转录本相比...

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Published in华南农业大学学报 Vol. 38; no. 3; pp. 1 - 8
Main Author 张爱玲 孙显月 卢孝璋 李加琪 张豪
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 广东第二师范学院 生物与食品工程学院/广东高校应用生态工程技术开发中心,广东 广州 510303 2017
华南农业大学 动物科学学院/广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室,广东 广州 510642%华南农业大学 动物科学学院/广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室,广东 广州,510642
Subjects
FAM213B基因
克隆
启动子
子宫内膜细胞
猪
硫氧还蛋白
转录
endometrial cell
transcription
thioredoxin
子宫内膜细胞
猪
FAM213B基因
pig
硫氧还蛋白
启动子
克隆
FAM213B gene
转录
promoter
cloning
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Summary:【目的】获得猪FAM213B基因完整mRNA和启动子序列，研究猪FAM213B基因表达，为探讨母猪妊娠的建立和胚胎发育调控机制奠定基础。【方法】通过5′RACE和3′RACE技术，获得基因完整mRNA序列，分析不同物种该基因氨基酸序列相似性；通过PCR克隆启动子区，并通过双荧光素酶报告基因载体系统转染猪子宫内膜细胞，研究其转录活性。【结果】猪FAM213B基因mRNA全长808 bp，其中5′UTR、CDS区和3′UTR长度分别为67、 609（含终止密码子）和132 bp（不含poly A序列），在17-106位氨基酸之间存在硫氧还蛋白折叠结构域；与猪FAM213B基因其他2个潜在转录本相比，三者都包含硫氧还蛋白折叠结构域，但蛋白三级结构存在较大差异；猪FAM213B氨基酸序列与山羊、牛和绵羊高度相似，相似性分别为94.03%、 93.03%和91.54%。克隆获得2 261 bp（-2 231/＋30）的基因启动子序列，将其连接至双荧光素酶报告基因载体，转染猪子宫内膜细胞，发现获得的启动子片段能够启动下游报告基因的转录，在启动子区存在潜在的典型NFκB等转录因子结合位点。【结论】本研究获得猪FAM213B基因转录本长度为808 bp，其蛋白存在硫氧还蛋白折叠功能结构域，其启动子序列（-2 231/＋30）在猪子宫内膜细胞中具有较强的转录活性。
Bibliography:Objective】To obtain the complete mRNA and promoter sequences of pig FAM213B gene, and provide a basis for studying the mechanism of the FAM213B gene in regulating gestation establishment and embryo development of female pigs.【Method】The complete mRNA sequence of the FAM213B gene was obtained using 5′ and 3′RACE methods.The amino acid sequence similarities of different species were analyzed. The gene promoter was cloned, and its transcription activity was detected by the dual luciferase report system in porcine endometrial cells.【Result】The mRNA of pig FAM213Bgene was 808 bp in full length, including the 5′UTR, CDS and 3′UTR of 67, 609 （including the termination codon） and 132 bp （excluding poly A）, respectively. A thioredoxin fold domain was predicted from the 17th to 106th amino acid residues. The obtained transcript and the other two computed transcripts all contained the thioredoxin fold domains, but the tertiary structures of three proteins were highly different. The amino acid sequence of pig FAM213B sho
ISSN:1001-411X
DOI:10.7671/j.issn.1001-411X.2017.03.001