重组质粒pEGFP-C1-LRIG1的构建及其在SHG44细胞中的稳定表达

目的构建含目的基因多亮氨酸重复区免疫球蛋白样区1（LRIG1）的重组质粒pEGFP-C1-LRIG1,为胶质瘤等多种上皮源性肿瘤的分子治疗奠定基础。方法采用RT-PCR方法,从人全血总RNA中,扩增出3 282bp的LRIG1cDNA片段,再用XhoⅠ和ClaⅠ双酶切后,定向克隆到真核细胞表达载体pEGFP-C1中,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒;免疫细胞化学法检测LRIG1基因的表达情况。结果人LRIG1基因的cDNA已克隆到真核细胞表达载体pEGFP-C1质粒中;经脂质体转染SHG44细胞后,G418进行筛选,可见转染细胞胞膜上有大量LRIG1蛋白表达。结论成功构建了p...

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Published in西安交通大学学报（医学版） Vol. 34; no. 4; pp. 541 - 544
Main Author 方园 屈建强 张熙 周乐 孙梦瑶 娄淼
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 西安交通大学医学院第二附属医院神经外科,陕西西安,710004 2013
西安市中心医院神经外科,陕西西安,710003%西安交通大学医学院第二附属医院神经外科,陕西西安,710004
Subjects
基因克隆
多亮氨酸重复区免疫球蛋白样区1（LRIG1基因）
真核表达载体pEGFP-C1
胶质瘤
重组质粒
真核表达载体pEGFP-C1
多亮氨酸重复区免疫球蛋白样区1(LRIG1基因)
重组质粒
胶质瘤
基因克隆
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ISSN1671-8259

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Summary:目的构建含目的基因多亮氨酸重复区免疫球蛋白样区1（LRIG1）的重组质粒pEGFP-C1-LRIG1,为胶质瘤等多种上皮源性肿瘤的分子治疗奠定基础。方法采用RT-PCR方法,从人全血总RNA中,扩增出3 282bp的LRIG1cDNA片段,再用XhoⅠ和ClaⅠ双酶切后,定向克隆到真核细胞表达载体pEGFP-C1中,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒;免疫细胞化学法检测LRIG1基因的表达情况。结果人LRIG1基因的cDNA已克隆到真核细胞表达载体pEGFP-C1质粒中;经脂质体转染SHG44细胞后,G418进行筛选,可见转染细胞胞膜上有大量LRIG1蛋白表达。结论成功构建了pEGFP-C1-LRIG1的真核表达载体,为研究LRIG1基因在胶质瘤等多种上皮源性肿瘤中的作用和其治疗奠定一定的实验基础。
Bibliography:FANG Yuan,QU Jian-qiang,ZHANG Xi,ZHOU Le,SUN Meng-yao,LOU Miao（1.Department of Neurosurgery,the Second Affiliated Hospital,Medical School of Xi＇an Jiaotong University,Xi＇an 710004;2.Department of Neurosurgery, the Central Hospital of Xi＇an,Xi＇an 710003,China）
gene cloning; eukaryotic expression vector of pEGFP-C1; recombinant plasmid; glioma; lecocine-rich repeats and immunoglobulin-like domain 1（LRIG1）
Objective To generate eukaryotic expression vector of pEGFP-C1-lecocine-rich repeats and immunoglobulin-like domain 1（LRIG1） and obtain its stable expression in SHG44 cells so as to lay the foundation for molecular therapy of glioma and other tumors of epithelial origin.Methods A 3 282 bp cDNA fragment was amplified from the total RNA of the human whole blood cells by RT-PCR method and cloned into the plasmid pEGFP-C1.The vector was identified by the double digestion with restriction enzymes XhoⅠ and ClaⅠ,and was sequenced by the Sanger-dideoxy-mediated chain termination.The expression of the LRIG1 gene was dete
ISSN:1671-8259