鸟枪法筛选枯草芽孢杆菌基因强启动子及对黄牛GHRL基因的表达

利用鸟枪法通过大肠埃希菌-枯草芽孢杆菌启动子探针载体分离到枯草芽孢杆菌168菌株的103个基因启动子片段,发现1个672 bp的启动子片段P3.4.23,能够在大肠埃希菌和枯草芽孢杆菌高效启动报告基因β-半乳糖苷酶的表达,其酶活性分别达到3 418、2 877 U/mL.相似性分析表明P3.4.23启动子片段具有枯草芽孢杆菌基因启动子的保守序列,并确定其转录活性区域位于5～333 bp,为yxiE基因的调控序列.将黄牛GHRL基因导入到启动子亚克隆序列下游,使该基因在枯草芽孢杆菌中得到了表达....

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Published in华南农业大学学报 Vol. 32; no. 3; pp. 92 - 96
Main Author 张爱玲 张丽 杨明明 张良志 陈宏
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 广东海洋大学农学院,广东湛江524088%西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,陕西杨凌712100%西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,陕西杨凌712100 2011
华南农业大学动物科学学院,广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室,广东广州510642%西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,陕西杨凌712100
徐州师范大学细胞与分子生物学研究所,江苏徐州221116
西北农林科技大学动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,陕西杨凌712100
Subjects
GHRL基因
启动子探针载体
大肠埃希菌
枯草芽孢杆菌
牛
鸟枪法
枯草芽孢杆菌
启动子探针载体
GHRL基因
牛
鸟枪法
大肠埃希菌
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Summary:利用鸟枪法通过大肠埃希菌-枯草芽孢杆菌启动子探针载体分离到枯草芽孢杆菌168菌株的103个基因启动子片段,发现1个672 bp的启动子片段P3.4.23,能够在大肠埃希菌和枯草芽孢杆菌高效启动报告基因β-半乳糖苷酶的表达,其酶活性分别达到3 418、2 877 U/mL.相似性分析表明P3.4.23启动子片段具有枯草芽孢杆菌基因启动子的保守序列,并确定其转录活性区域位于5～333 bp,为yxiE基因的调控序列.将黄牛GHRL基因导入到启动子亚克隆序列下游,使该基因在枯草芽孢杆菌中得到了表达.
Bibliography:Bacillus subtilis; Escherichia coli; promoter probe vector; GHRL gene; cattle; shot-gun method
ZHANG Ai-ling,ZHANG Li,YANG Ming-ming,ZHANG Liang-zhi,CHEN Hong（1 Shaanxi Key Laboratory of Molecular Biology for Agriculture,College of Animal Science and Technology,Northwest A＆F University,Yangling 712100,China;2 Cuangdong Provincial Key Lab of Agro-Animal Genomics and Molecular Breeding,College of Animal Science,South China Agricultural University,Guangzhou 510642,China;3 Agricultural College,Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China;4 Institute of Cellular and Molecular Biology,Xuzhou Normal University,Xuzhou 221116,China）
44-1110/S
Through shot-gun method,one hundred and three DNA segments of promoter from genomic library of 168 Bacillus subtilis were detected with Escherichia coli-B.subtilis shuttle plasmid.The activities of the reporter gene of bgaB driven by one promoter fragment,P3.4.23,exhibited high expression strength both in E.coli and B.subtilis.The fragment was 672 bp long and stronger than P43
ISSN:1001-411X
DOI:10.3969/j.issn.1001-411X.2011.03.021