单疱疹病毒结构蛋白BVP22的亚细胞定位及在细胞间的穿梭

• Published in: Zhongguo fei ai za zhi Vol. 9; no. 2; pp. 162 - 166
• Main Author: 关丽英 汪惠 赖百塘
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 101149,北京市结核病胸部肿瘤研究所细胞室 2006
• Subjects: BVP22; 单克隆细胞系; 细胞定位; 细胞间穿梭; 单克隆细胞系; 细胞定位; 细胞间穿梭; BVP22
• ISSN: 1009-3419; 1999-6187

背景与目的单疱疹病毒结构蛋白BVP22具有在细胞间穿梭的特性，并能够携带与其融合的蛋白从细胞内合成后穿梭到周围的细胞，克服了基因治疗中转染效率低的问题。本研究的目的是检测BVP22蛋白在细胞中的定位及体内外的穿梭，为将其应用于肺癌的基因治疗提供依据。方法Lipofectamin介导质粒pEYFP和pEYFP-BVP22转染肺癌细胞系801D，G418筛选，建立单克隆细胞系。荧光观察确定BVP22的表达及定位。单克隆细胞系与母系801D以一定比例混合培养，采用流式细胞分选计数、免疫细胞化学染色检测BVP22在细胞间的穿梭。建立裸鼠移植瘤，脂质体包裹质粒注入瘤体检测BVP22在实体瘤中的穿梭。结果成功获得单克隆细胞系pEYFP-801D和pEYFP-BVP22-801D。BVP22在细胞中的定位表现出多相性，多数为胞核定位，少数为胞质丝状定位。流式细胞计数显示，随培养时间延长，YFP阳性细胞的比例无明显增加。免疫细胞化学染色显示pEYFP-BVP22-801D与801D混合培养24h后，几乎所有细胞的胞核都染成了棕黄色；裸鼠移植瘤的免疫组化染色显示注射pEYFP-BVP22的肿瘤组织大部分被染成棕黄色。结论BVP22主要定位于细胞核中，其胞核定位可能与细胞分裂及其在细胞间穿梭相关。在体内外BVP22均能够介导与其融合的蛋白在细胞间发生穿梭。