绵羊肺炎支原体膜蛋白p74基因的克隆、分子特征及反应原性研究

【方法】利用PCR方法对绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,MO）新疆分离株MO-XJ p74基因进行扩增、克隆及测序,分析其分子特征。将P74蛋白抗原集中区编码序列亚克隆至表达载体p ET-32a（＋）,构建重组表达载体p ET-32a（＋）-p74C,转化至E.coli BL21（DE3）感受态细胞中,IPTG诱导表达。【结果】MO-XJ p74基因全长2016 bp,编码671个氨基酸;对编码的氨基酸序列分析发现,该蛋白不含信号肽序列,9~31位氨基酸序列含有1个跨膜区,有16个N-糖基化位点、7个N-酰基化位点、17个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点及5个蛋白激酶C...

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Published in西南农业学报 Vol. 30; no. 5; pp. 1222 - 1228
Main Author 卢海亭 孟庆玲 乔军 彭叶龙 陈诚 田路路 贡莎莎 才学鹏 陈创夫
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 石河子大学动物科技学院,新疆石河子,832003%阿克苏地区动物疫病控制诊断中心,新疆阿克苏,843000%中国农业科学院兰州兽医研究所,甘肃兰州,730046 2017
Subjects
p74基因
克隆
原核表达
反应原性
序列分析
绵羊肺炎支原体
克隆
p74 gene
Prokaryotic expression
原核表达
Cloning
绵羊肺炎支原体
序列分析
反应原性
p74基因
Mycoplasma ovipneumoniae
Sequence analysis
Reactogenicity
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ISSN1001-4829
DOI10.16213/j.cnki.scjas.2017.5.041

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Summary:【方法】利用PCR方法对绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,MO）新疆分离株MO-XJ p74基因进行扩增、克隆及测序,分析其分子特征。将P74蛋白抗原集中区编码序列亚克隆至表达载体p ET-32a（＋）,构建重组表达载体p ET-32a（＋）-p74C,转化至E.coli BL21（DE3）感受态细胞中,IPTG诱导表达。【结果】MO-XJ p74基因全长2016 bp,编码671个氨基酸;对编码的氨基酸序列分析发现,该蛋白不含信号肽序列,9~31位氨基酸序列含有1个跨膜区,有16个N-糖基化位点、7个N-酰基化位点、17个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点及5个蛋白激酶C磷酸化位点。同源性分析显示MO-XJ P74蛋白氨基酸序列与标准株MO-SC01氨基酸序列同源率为86.5%,其羧基端为P74蛋白抗原集中区。SDS-PAGE检测结果显示,表达的P74蛋白抗原表位集中区片段对分子质量约为35.5 k Da,与理论值相符;Western blot分析表明重组P74蛋白具有较强的反应原性。【结论】本研究为进一步筛选MO亚单位疫苗及血清学诊断的候选抗原奠定了前期基础。
Bibliography:51-1213/S
LU Hai-ting1 , MENG Qing-ling1 , QIAO Jun1 , PENG Ye-long2 , CHEN Cheng1 , TIAN Lu-lu1 , GONG Sha-sha1, CAI Xue-peng3, CHEN Chuang-fu1 （ 1. College of Animal Science and Technology, Shihezi University, Xinjiang Shihezi 832003, China; 9. Center of Animal Disease Control and Diagnosis in Aksu Area, Xinjiang Aksu 843000, China; 3. Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Gansu Lanzhou 730046, China）
Mycoplasma ovipneumoniae ; p74 gene ; Cloning; Sequence analysis ; Prokaryotic expression ; Reactogenicity
[ Method ] The p74 gene of Mycoplasma Ovipneumoniae （MO） Xinjiang isolate （MO-XJ） was amplified by PCR and then cloned, sequenced. The molecular biological characteristics were analyzed and the main antigenic domain of the P47 protein were predicted. The am- plified products were then further subcloned in the expression vector pET-32a（ ＋ ） to obtain the recombinant expression pET-32a（ ＋ ） -p74C vector. The recombinant expression pET-32a（ ＋ ） -p74C vector was transfo
ISSN:1001-4829
DOI:10.16213/j.cnki.scjas.2017.5.041