农杆菌介导的AtMYB118基因转化橡胶树易碎胚性愈伤组织体系优化

[目的]采用正交设计L25（56）优化农杆菌介导的AtMYB118基因对橡胶树易碎胚性愈伤组织的遗传转化体系,为橡胶树品种遗传改良提供参考.[方法]以75.0 mg/L卡那霉素筛选经过转化的愈伤组织;采用GUS瞬时表达检测方法评价6个因素即预培养时间、农杆菌菌液浓度（OD600）、乙酰丁香酮（AS）浓度、侵染时间、共培养温度和共培养时间对遗传转化的影响.[结果]6个因素显著影响橡胶树长期培养的易碎胚性愈伤组织的转化频率,易碎胚性愈伤组织遗传转化优化条件为：预培养0d,菌液OD600为0.7,侵染时间7 min,共培养时间5d,AS 200 μmol/L,共培养温度25℃.在此优化条件下可获得最...

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Published in南方农业学报 Vol. 45; no. 7; pp. 1137 - 1146
Main Author 毕政鸿 李哲 王志秋 戴雪梅 方家林 黄华孙 林位夫 LARDET Ludovic MONTORO Pascal CARRON Marc-Philippe LECLERCQ Julie 左建儒 牟金叶 杨晓辉 李响
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 海南大学农学院,海口,570228%中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/国家重要热带作物工程技术研究中心,海南儋州,571737%法国农业研究国际合作中心生物系统部,法国蒙彼利埃34398 2014
Subjects
AtMYB118基因
农杆菌介导的遗传转化
反转录PCR
易碎胚性愈伤组织
橡胶树
转基因植株
Hevea brasiliensis
橡胶树
农杆菌介导的遗传转化
transgenic plantlets
Agrobacterium-mediated genetic transformation
RT-PCR
AtMYB118 gene
friable embryogenic calli
AtMYB118基因
易碎胚性愈伤组织
转基因植株
反转录PCR
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Summary:[目的]采用正交设计L25（56）优化农杆菌介导的AtMYB118基因对橡胶树易碎胚性愈伤组织的遗传转化体系,为橡胶树品种遗传改良提供参考.[方法]以75.0 mg/L卡那霉素筛选经过转化的愈伤组织;采用GUS瞬时表达检测方法评价6个因素即预培养时间、农杆菌菌液浓度（OD600）、乙酰丁香酮（AS）浓度、侵染时间、共培养温度和共培养时间对遗传转化的影响.[结果]6个因素显著影响橡胶树长期培养的易碎胚性愈伤组织的转化频率,易碎胚性愈伤组织遗传转化优化条件为：预培养0d,菌液OD600为0.7,侵染时间7 min,共培养时间5d,AS 200 μmol/L,共培养温度25℃.在此优化条件下可获得最高转化频率.经过4～6个月的筛选,获得17个GUS染色阳性的易碎愈伤组织系.经PCR和反转录PCR分析转化愈伤组织,进一步证实uidA、nptⅡ、AtMYB118基因已被整合到愈伤组织基因组中并表达.培养获得1539个胚状体,其中164个为转基因胚状体,转化频率为10.6％;最终获得4株转AtMYB118基因植株.[结论]优化获得可行有效的橡胶树易碎胚性愈伤组织遗传转化体系,可为其品种遗传改良提供技术支持.
Bibliography:45-1381/S
BI Zheng-hong,LI Zhe,WANG Zhi-qiu,DAI Xue-mei,FANG Jia-lin,HUANG Hua-sun,LIN Wei-fu（ 1.College of Agronomy, Hainan University, Haikou 570228, China; 2.Rubber Research Institute, CATAS/Key Laboratory of Rubber Biology and Genetic Resources Utilization, Ministry of Agriculture/State Engineering and Technology Research Center for Key Tropical Crops, Danzhou, Hainan 571737, China; Equipe BURST-UMR AGAP, Deartement BIOS, CIRAD, Montpellier 34398, France; 4 . Institute of Genetics and Developmental Biology, CAS, Beijing 100101, China; 5Environment and Plant Protection College, Hainan University, Haikou 570228, China）
Hevea brasiliensis; Agrobacterium-mediated genetic transformation; AtMYB118 gene; RT-PCR; friable embryogenic calli; transgenic plantlets
[Objective] An orthogonal design L25 （56） was used to optimize Agrobacterium-mediated AtMYB118 gene genetic transformtion system of friable embryogenic calli in Hevea brasiliensis in order to provide references for genetic improvement of its clones.[Method]Kan
ISSN:2095-1191
DOI:10.3969/j:issn.2095-1191.2014.7.1137