合浦珠母贝矿化基因Pearlin重组蛋白的表达条件优化

为了获得稳定高表达的合浦珠母贝（Pinctada fucata）壳基质蛋白Pearlin基因的重组融合蛋白，该研究从合浦珠母贝外套膜总RNA中扩增得到Pearlin的cDNA，将其ORF克隆至原核表达载体pET32a构建得到重组质粒pET32a．Pearlin，并转化表达宿主菌大肠杆菌（E．coli）BL21（DE3），得到的原核重组融合蛋白pET32a—Pearlin约为34．19kD。对重组融合蛋白表达所需IPTG诱导浓度、培养温度、培养基pH及IPTG诱导时问、时机进行了优化。结果显示，IPTG浓度在0．6—1．4mmol·L^-1范围内诱导效果最佳；在IPTG终浓度为1mmol·L^-...

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Published in南方水产科学 Vol. 11; no. 6; pp. 100 - 106
Main Author 毕晓敏 黄桂菊 范嗣刚 朱文杰 喻达辉
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 中国水产科学研究院南海水产研究所,农业部南海渔业资源开发利用重点实验室,南海生物资源开发与利用协同创新中心,广东广州510300 2015
上海海洋大学水产与生命学院,上海201306%中国水产科学研究院南海水产研究所,农业部南海渔业资源开发利用重点实验室,南海生物资源开发与利用协同创新中心,广东广州510300
Subjects
Pearlin
包涵体
原核表达
合浦珠母贝
表达条件优化
合浦珠母贝
inclusion body
Pearlin
原核表达
包涵体
optimization of expression condition
表达条件优化
prokaryotic expression
pearl oyster
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ISSN2095-0780
DOI10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.014

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Summary:为了获得稳定高表达的合浦珠母贝（Pinctada fucata）壳基质蛋白Pearlin基因的重组融合蛋白，该研究从合浦珠母贝外套膜总RNA中扩增得到Pearlin的cDNA，将其ORF克隆至原核表达载体pET32a构建得到重组质粒pET32a．Pearlin，并转化表达宿主菌大肠杆菌（E．coli）BL21（DE3），得到的原核重组融合蛋白pET32a—Pearlin约为34．19kD。对重组融合蛋白表达所需IPTG诱导浓度、培养温度、培养基pH及IPTG诱导时问、时机进行了优化。结果显示，IPTG浓度在0．6—1．4mmol·L^-1范围内诱导效果最佳；在IPTG终浓度为1mmol·L^-1、相同培养时间（6h）下，37℃表达蛋白最多；重组蛋白在pH分别为6．0、7．0、8．0的培养基中表达量变化不大；在IPTG诱导浓度一定的条件下，最佳诱导时间为4～6h；在IPTG诱导浓度和诱导时间一定的条件下，在转接3～4h后进行IPTG诱导蛋白表达量较理想。对重组融合蛋白pET32a·Peadin的可溶性进行检测，发现在不同的诱导条件下，融合蛋白都主要以包涵体形式存在。
Bibliography:BI Xiaomin, HUANG Guiju, FAN Sigang, ZHU Wenjie, YU Dahui （1. Key Lab. of South China Sea Fishery Resources Exploitation ＆ Utilization, Ministry of Agriculture; South China Sea Resource Exploitation and Protection Collaborative Innovation Center （SCS-REPIC） ; South China Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Guangzhou 510300, China; 2. College of Fisheries and Life Sciences, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China）
To obtain high and stable expression recombinant fusion protein of Pearlin, we constructed the recombinant vector by using the open reading frames （ORF） of Pearlin cloned from the mantle tissue of pearl oyster （Pinctadafucata） and optimized the expression conditions. The Pearlin ORF was cloned into the vector pET32a and the plasmids of pET32a-Pearlin were obtained and then transformed into E. coli BL21 （ DE3 ）. His-tagged insoluble fusion protein was highly expressed and the molecular weight of the fusion protein was about 34. 19 kD. We optimized the condit
ISSN:2095-0780
DOI:10.3969/j.issn.2095-0780.2015.06.014