罗非鱼无乳链球菌LrrG-Sip融合基因原核表达载体的构建及表达

LrrG和表面免疫原性蛋白（Sip）是无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）的2种表面蛋白,具有良好的免疫原性。为获得罗非鱼无乳链球菌表面蛋白LrrG和Sip蛋白的融合蛋白,该试验采用基因拼接技术中的双酶切法分2步逐个将Sip和LrrG基因插入pColdⅡ载体中,构建原核表达载体pColdⅡ-LrrG-Sip。将成功构建的融合基因原核表达载体转化感受态细胞BL21（DE3）,进行诱导表达条件的优化。结果显示,15℃、IPTG 0.5 mmol·L-1诱导9 h,目的蛋白呈可溶状态的表达量最高。Western Blot检测结果显示LrrG-Sip融合蛋白大小与预测一致（1...

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Published in南方水产科学 Vol. 10; no. 5; pp. 17 - 23
Main Author 曾祖聪 曹建萌 卢迈新 可小丽 刘志刚 高风英 朱华平
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 上海海洋大学水产与生命学院，上海201306%中国水产科学研究院珠江水产研究所，农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室，广东 广州510380 2014
中国水产科学研究院珠江水产研究所，农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室，广东 广州510380
Subjects
LrrG
Sip
原核表达载体
无乳链球菌
罗非鱼
融合基因
tilapia
fusion gene
罗非鱼
无乳链球菌
融合基因
prokaryotic expression vector
Sip
原核表达载体
Streptococcus agalactiae
LrrG
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ISSN2095-0780
DOI10.3969/j.issn.2095-0780.2014.05.003

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Summary:LrrG和表面免疫原性蛋白（Sip）是无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）的2种表面蛋白,具有良好的免疫原性。为获得罗非鱼无乳链球菌表面蛋白LrrG和Sip蛋白的融合蛋白,该试验采用基因拼接技术中的双酶切法分2步逐个将Sip和LrrG基因插入pColdⅡ载体中,构建原核表达载体pColdⅡ-LrrG-Sip。将成功构建的融合基因原核表达载体转化感受态细胞BL21（DE3）,进行诱导表达条件的优化。结果显示,15℃、IPTG 0.5 mmol·L-1诱导9 h,目的蛋白呈可溶状态的表达量最高。Western Blot检测结果显示LrrG-Sip融合蛋白大小与预测一致（162kDa）,说明成功构建了融合基因,为罗非鱼源无乳链球菌亚单位疫苗的研制奠定了基础。
Bibliography:ZENG Zucong, CAO Jianmeng , LU Maixin , KE Xiaoli , LIU Zhigang , GAO Fengying , ZHU Huaping （ 1. Key Lab. of Tropical ＆ Subtropical Fishery Resource Application ＆ Cultivation, Ministry of Agriculture ; Pearl River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Guangzhou 510380, China ; 2. College of Fisheries ＆ Life, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China）
LrrG （leucine-rich repeat protein from GBS） and Sip （surface immunogenic protein）, which are two kinds of surface anti- gen proteins from Streptococcus agalactiae in tilapia, have good immunogenicity. To obtain the LrrG-Sip fusion protein via coalescing surface antigen protein LrrG and Sip of S. agalctiae in tilapia, we cloned Sip and LrrG genes into vector pCold 11 one by one using double enzyme method of gene splicing technology, and constructed a prokaryotic expression vector pCold II -LrrG-Sip. The recombinant plasmid was transformed into E. coli BL21 （DE3） , and the result indicated that 9 h, 15 ℃ , 0. 5 mmol·L^-1 IPTG we
ISSN:2095-0780
DOI:10.3969/j.issn.2095-0780.2014.05.003