肝癌细胞蛋白差异凝胶电泳技术系统评估方法

• Published in: Fēnxī huàxué Vol. 34; no. 11; pp. 1519 - 1523
• Main Author: 方勤美 孙薇 焦丽燕 钱小红 姜颖 夏春 贺福初
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 军事医学科学院放射医学研究所,北京,100850 2006; 中国农业大学动物医学院,北京,100094; 福建省农业科学院,福洲,350001%军事医学科学院放射医学研究所,北京,100850%中国农业大学动物医学院,北京,100094
• Subjects: 二维差异凝胶电泳; 系统评估; 细胞收集; 肝癌细胞; 蛋白提取; 细胞收集; 肝癌细胞; 系统评估; 蛋白提取; 二维差异凝胶电泳
• ISSN: 0253-3820
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-3820.2006.11.002

利用二维差异凝胶电泳技术（two-dimensional differential in-gel eleetrophoresis，2D-DIGE）研究肝癌细胞与正常细胞的差异时应先对其蛋白样品进行标记系统评估，以确保正式实验的成功。在细胞水平上展开蛋白质组研究应尽可能提取到细胞的所有蛋白，为此本研究先比较了机械刮除法、胰酶消化法和PBSE消化法收获肝癌细胞后的细胞形态与蛋白得率，结果显示PBSE消化法收集肝癌细胞时细胞形态完整。提取的蛋白得率最高。然后将提取的细胞蛋白经DIGE^TM试剂盒的3重荧光（Cy2、Cy3、Cy5）标记后再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和双向电泳（2DE，two-dimensional electrophoresis）。前者图像使用Image Quant软件进行分析，结果说明肝癌细胞蛋白提取液与该染料能相互兼容，样品得到了有效的标记。2DE的扫描图像使用DeCyder5．0软件的胶内分析（differential in-gelanalysis，DIA）和胶间分析（biological variation analysis，BVA）模式，结果表明，Cy3和Cy5标记的蛋白质定量结果基本一致，但该染料标记肝癌细胞蛋白后会造成极少量蛋白出现位置偏差，给蛋白定量带来一定的误差影响。而BVA中的反标策略能够有效纠止这种南于不同荧光标记带来的定量误差。总之。本研究首次报道了用同一肝癌样品进行不同荧光标记后进行2DE的评估方法。该方法支持了DIGE体系定量的可靠性，而且能给出定量的误差范围，完善了评估体系，为DIGE技术平台的质量控制提供了参考。