基于杂交链式反应辅助多重信号放大的端粒酶灵敏检测

端粒酶是真核细胞维持端粒长度的关键逆转录酶,其生物活性的高低可以为多种癌症的临床诊断和预后治疗提供有价值的信息.本研究以人宫颈癌细胞（HeLa细胞）裂解液中的端粒酶为研究对象,通过借助杂交链式反应辅助多重信号放大策略,提出了一种新颖、灵敏的检测端粒酶电化学方法.首先将端粒酶的延伸引物自组装在金电极表面,当端粒酶存在时,端粒酶能够催化引物的延伸,产生与发卡环探针H1部分互补的序列,进而引发杂交链式反应,形成由两个发卡环探针（H1和H2）交替杂交而形成的DNA长链.由于H1和H2末端均修饰有生物素,加入链霉亲和素修饰辣根过氧化物酶后,辣根过氧化物酶被被连接到电极表面,催化邻苯二胺氧化生成2,3-二...

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Published in分析化学 Vol. 45; no. 12; pp. 1903 - 1908
Main Author 曹亚;康明扬;陈红;唐盈盈;冯畅;赵婧;李根喜
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 南京大学生物化学系,医药生物技术国家重点实验室,南京210093 2017
上海大学生命科学学院,分子识别与生物传感研究中心,上海200444%南京大学生物化学系,医药生物技术国家重点实验室,南京210093%上海大学生命科学学院,分子识别与生物传感研究中心,上海200444
Subjects
信号放大
杂交链式反应
电化学技术
端粒酶
Hybridization chain reaction
电化学技术
信号放大
杂交链式反应
Electrochemical technique
Telomerase
端粒酶
Signal amplification
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Summary:端粒酶是真核细胞维持端粒长度的关键逆转录酶,其生物活性的高低可以为多种癌症的临床诊断和预后治疗提供有价值的信息.本研究以人宫颈癌细胞（HeLa细胞）裂解液中的端粒酶为研究对象,通过借助杂交链式反应辅助多重信号放大策略,提出了一种新颖、灵敏的检测端粒酶电化学方法.首先将端粒酶的延伸引物自组装在金电极表面,当端粒酶存在时,端粒酶能够催化引物的延伸,产生与发卡环探针H1部分互补的序列,进而引发杂交链式反应,形成由两个发卡环探针（H1和H2）交替杂交而形成的DNA长链.由于H1和H2末端均修饰有生物素,加入链霉亲和素修饰辣根过氧化物酶后,辣根过氧化物酶被被连接到电极表面,催化邻苯二胺氧化生成2,3-二氨基吩嗪,产生显著的电化学信号.实验结果表明,本研究建立的端粒酶电化学检测方法高效、可行,线性范围宽,灵敏度高,可以检测每毫升10个HeLa细胞裂解液中的端粒酶.本方法具有较好的选择性,能有效区分端粒酶和对照蛋白.
Bibliography:22-1125/O6
ISSN:0253-3820
DOI:10.11895/j.issn.0253-3820.171340