斑节对虾血淋巴低丰度蛋白双向电泳技术体系的优化

文章探索并优化了斑节对虾（Penaeus monodon）血淋巴双向电泳技术体系，对斑节对虾血淋巴总蛋白抽提方法进行优化，减小高丰度蛋白的影响；对双向电泳过程各步骤，如IPG胶条pH范围的选择、等电聚焦程序、上样量等进行了优化，得到高分辨率的2-DE图谱，用PDQuest软件进行了初步分析。结果表明，用PEG 6000能更快捷有效地去除血淋巴中的高丰度蛋白，增加低丰度蛋白的点数及浓度；在抽提蛋白过程中，利用预冷的80%丙酮洗涤，在一向电泳过程中设置100 V低压除盐，能更有效地去除蛋白中的盐分；采用18 cm、pH 3~10 NL 的中型胶条，能更好地显示低丰度蛋白点的分布；被动水化上样300...

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Published in南方水产科学 Vol. 10; no. 1; pp. 35 - 42
Main Author 徐梦婷 傅明骏 黄建华 周发林 邱丽华 江世贵
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 中国水产科学研究院南海水产研究所,农业部南海渔业资源开发利用重点实验室,广州广东510300 2014
华南农业大学动物科学学院,广东广州510642%中国水产科学研究院南海水产研究所,农业部南海渔业资源开发利用重点实验室,广州广东510300
Subjects
低丰度蛋白
斑节对虾
蛋白质组
血淋巴
血淋巴
proteomics
斑节对虾
蛋白质组
Penaeus monodon
低丰度蛋白
haemolymph
low abundance protein
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ISSN2095-0780
DOI10.3969/j.issn.2095-0780.2014.01.006

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Summary:文章探索并优化了斑节对虾（Penaeus monodon）血淋巴双向电泳技术体系，对斑节对虾血淋巴总蛋白抽提方法进行优化，减小高丰度蛋白的影响；对双向电泳过程各步骤，如IPG胶条pH范围的选择、等电聚焦程序、上样量等进行了优化，得到高分辨率的2-DE图谱，用PDQuest软件进行了初步分析。结果表明，用PEG 6000能更快捷有效地去除血淋巴中的高丰度蛋白，增加低丰度蛋白的点数及浓度；在抽提蛋白过程中，利用预冷的80%丙酮洗涤，在一向电泳过程中设置100 V低压除盐，能更有效地去除蛋白中的盐分；采用18 cm、pH 3~10 NL 的中型胶条，能更好地显示低丰度蛋白点的分布；被动水化上样300 μg结合硝酸银染色方法，能有效提高双向电泳图谱中蛋白点的分离度和分辨率。该试验为斑节对虾及其他甲壳动物血淋巴蛋白质组学相关研究提供了稳定可重复的研究方法。
Bibliography:Penaeus monodon ; haemolymph ; low abundance protein ; proteomics
XU Mengting1,2, FU Mingjun1, HUANG Jianhua1, ZHOU Falin1, QIU Lihua1, JIANG Shigui1 1. Key Lab. of South China Sea Fishery Resources Exploitation ＆ Utilization, Ministry of Agriculture; South China Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Guangzhou 510300, China; 2. College of Animal Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China
44-1683/S
We optimized the two-dimensional electmphoresis technique for analyzing hemolymph in Penaeus monodon. To obtain high resolution 2-DE patterns, we examined the protein extraction, IPG-strip length, separation scope of IPG strip, sample loading amount and focusing condition by PDQuest software. Results indicate that PEG 6000 removed high abundance protein in haemolymph faster and more effectively, and increased the concentration of low abundance protein. The protein preparation with 80% TCA-acetone extraction treatment in isoelectric focusing was effective. The
ISSN:2095-0780
DOI:10.3969/j.issn.2095-0780.2014.01.006