Apelin-13对5-Aza诱导脐带间充质干细胞向心肌细胞分化的影响

目的 探讨apelin-13蛋白在体外对5-氮胞苷（5-Aza）诱导人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）向心肌细胞分化的影响。方法 采用组织块贴壁法培养hUC-MSCs，胰酶消化传代；取P2代细胞置于不同分化条件的培养液中分化培养14d，实验分为A、B、C、D组（apelin-13浓度分别为0、1×10－6、2×10－6和10×10－6mol/L），各组培养基中5-Aza浓度均为10×10－6mol/L。采用流式细胞仪检测hUC-MSCs表面免疫标记，MTT法检测细胞在570nm处的吸光度（A）值，RTPCR检测肌钙蛋白T（cTnT）、GATA-4 mRNA表达水平，免疫组织化学染色法检测心...

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Published inJie fang jun yi xue za zhi Vol. 38; no. 10; pp. 796 - 800
Main Author 徐小红 王力 张宁坤 郑楠 高连如 朱智明
Format Journal Article
LanguageChinese
Published Beijing People's Military Medical Press 2013
Subjects
5-氮胞苷
apelin-13
Cardiomyocytes
Stem cells
Umbilical cord
心肌
细胞分化
脐带
间质干细胞
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ISSN0577-7402
DOI10.11855/j.issn.0577-7402.2013.10.003

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Summary:目的 探讨apelin-13蛋白在体外对5-氮胞苷（5-Aza）诱导人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）向心肌细胞分化的影响。方法 采用组织块贴壁法培养hUC-MSCs，胰酶消化传代；取P2代细胞置于不同分化条件的培养液中分化培养14d，实验分为A、B、C、D组（apelin-13浓度分别为0、1×10－6、2×10－6和10×10－6mol/L），各组培养基中5-Aza浓度均为10×10－6mol/L。采用流式细胞仪检测hUC-MSCs表面免疫标记，MTT法检测细胞在570nm处的吸光度（A）值，RTPCR检测肌钙蛋白T（cTnT）、GATA-4 mRNA表达水平，免疫组织化学染色法检测心肌细胞表面标志物cTnT的表达。结果 流式细胞仪鉴定结果表明，hUC-MSCs表达CD44、CD90、CD105、CD73、经典人类白细胞抗原Ⅰ类抗原（HLAABC），不表达CD34、CD45、经典人类白细胞抗原Ⅱ类抗原（HLA-DR）。MTT检测显示，0、10×10－6mol/L apelin-13处理的hUC-MSCs在570nm处的A值分别为0.841±0.290、0.875±0.325，差异无统计学意义（P〉0.05）。B、C、D组cTnT mRNA表达水平分别是A组的2.09±1.35、5.24±1.30、1.17±0.63倍，B、C、D组GATA-4 mRNA表达水平分别是A组的2.68±1.18、4.82±0.14、2.14±0.27倍；C组与B、D组比较，cTnT、GATA-4 mRNA表达差异具有统计学意义（P〈0.05）。免疫组化染色显示，诱导14d后C组细胞cTnT蛋白表达呈阳性。结论 10×10－6mol/L apelin-13对hUC-MSCs无毒性作用，一定浓度的apelin-13蛋白可增强5-Aza诱导hUC-MSCs向心肌细胞分化的效率，浓度为2×10－6mol/L时增强作用最明显。
Bibliography:Objective To explore the influence of apelin-13 on 5-azacytidine （5-Aza） inducing differentiation of human umbilical cord mesenchymal stem cells （hUC-MSCs） to cardiomyocytes. Methods hUC-MSCs were cultivated by tissue adherent method, and subcultured after digested with trypsin. The second passage cells （P2） were cultured for 14 days with different concentrations of apelin-13 （0, 1×10–6mol/L, 2×10–6 and 10×10–6mol/L apelin-13, called as group A, B, C and D respectively）, and the concentration of 5-Aza was 10×10–6mol/L in each group. Immune markers on the surface of hUC-MSCs were detected by flow cytometry, the absorbance （Avalue） of cultured cells at 570nm was detected by MTT method, the mRNA expression levels of troponin T （cTnT） and GATA-4 were determined by RT-PCR, and the expression of cTnT （myocardial cell surface marker） was observed by immunohistochemistry. Results HUC-MSCs expressed CD44, CD90, CD105, CD73 and HLA-ABC, but did not express CD34, CD45 or HLA-DR. The Avalue at 570nm of hUC-MSCs treated w
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ISSN:0577-7402
DOI:10.11855/j.issn.0577-7402.2013.10.003