Development and validation of a genotyping kit for the eight principal human platelet alloantigen systems

• Published in: Transfusion clinique et biologique (Paris) Vol. 7; no. 1; pp. 51 - 62
• Main Authors: Dormoy, A., Hanau, D., Tongio, M.M., Cazenave, J.P.
• Format: Journal Article Conference Proceeding
• Language: English
• Published: Paris Elsevier SAS 01.02.2000; Elsevier
• Subjects: Alleles; allo-antigènes plaquettaires humains; Antigens, Human Platelet - analysis; Biological and medical sciences; contrôle de qualité; DNA Primers; Evaluation Studies as Topic; Genotype; Hematology; Histocompatibility Testing; human platelet alloantigens; Humans; Indicators and Reagents; Investigative techniques, diagnostic techniques (general aspects); Medical sciences; Pathology. Cytology. Biochemistry. Spectrometry. Miscellaneous investigative techniques; PCR-SSP; Polymerase Chain Reaction - methods; quality control; Reagent Kits, Diagnostic - standards; Temperature; Time Factors; PCR-SSP; allo-antigènes plaquettaires humains; human platelet alloantigens; quality control; contrôle de qualité; Human; Thrombocytopenia; Validation; Typing; Genotype; Hemopathy; Laboratory measurement; Medical screening; Design; Isoimmunization; Polymerase chain reaction; Blood cell; Platelet; Alloantigen; Quality control
• ISSN: 1246-7820
• DOI: 10.1016/S1246-7820(00)88712-1

Thrombocytopenia in newborns is often due to maternal alloimmunization against platelet alloantigens of the foetus which have been inherited from the father and are absent in the mother. Our aim was to develop a “ready-to-use” typing kit based on polymerase chain reactions, using sequence-specific primers for rapid and simultaneous genotyping of the eight principal human platelet alloantigens. The typing technique uses two specific primer pairs for each bi-allelic system and a monomorphic primer pair as amplification control, with a single temperature cycle programme and identical PCR stringency conditions for all pairs of primers. This kit allows typing of blood samples of small volume within three hours after reception. Validation criteria are essential to check the reliability and specificity of the test, and DNA controls carrying the targeted HPA alleles must be obtained from typed individuals or created in vitro by PCR. La thrombocytopénie du nouveau-né est souvent due à une immunisation maternelle dirigée contre des allo-antigènes plaquettaires paternels et le typage des parents et de l'enfant permet de valider les allo-antigènes plaquettaires incompatibles. Nous avons développé une trousse de typage ≪ prête à l'emploi ≫ basée sur des réactions de polymérase en chaîne (PCR) avec des amorces séquence spécifiques permettant le génotypage simultané des huit systèmes d'allo-antigènes plaquettaires principaux en trois heures à partir de la réception de l'échantillon sanguin. Chaque système bi-allélique est analysé à l'aide de deux couples d'amorces spécifiques auxquels est ajouté un couple d'amorces monomorphiques servant de témoin d'amplification, suivant un programme unique de températures et des conditions de stringence de PCR identiques pour tous les couples d'amorces. La détermination de critères de validation est essentielle pour vérifier la fiabilité et la spécificité des réactifs composant la trousse. Des ADN de référence portant les différents allèles testés sont nécessaires et ont été obtenus à partir d'individus typés ou créés artificiellement in vitro par PCR.