High frequency shoot regeneration from trifoliate orange ( Poncirus trifoliata L. Raf.) using the thin cell layer method

• Published in: Comptes rendus de l'Académie des sciences, Série III, Sciences de la vie Vol. 322; no. 12; pp. 1105 - 1111
• Main Authors: Van Le, Bui, Thanh Ha, N, Anh Hong, L.T, Trân Thanh Vân, Kim
• Format: Journal Article
• Language: English
• Published: Paris Elsevier B.V 01.12.1999; Elsevier
• Subjects: Biological and medical sciences; couche cellulaire mince transversale (CCMt); Fundamental and applied biological sciences. Psychology; Plant physiology and development; Poncirus trifoliata; régénération des plantes; shoot regeneration; Tissue cultures, protoplasts; transverse thin cell layer (tTCL); shoot regeneration; Poncirus trifoliata; couche cellulaire mince transversale (CCMt); régénération des plantes; transverse thin cell layer (tTCL); Culture medium; Cell culture; Transplanting; Citrus fruit; Rutaceae; Micropropagation; Microplant; Regeneration; Internode; Dicotyledones; Angiospermae; Development; Plant growth substance; Spermatophyta
• ISSN: 0764-4469
• DOI: 10.1016/S0764-4469(99)00110-9

A method for a high frequency and direct in vitro bud regeneration of a woody species, the trifoliate orange ( Poncirus trifoliata L. Raf), was designed. Transverse thin cell layer (tTCL) explants excised from the stem internodes of 1-year-old young plants of P. trifoliata regenerated bud in vitro on a medium containing 6-benzylaminopurine (BAP 1-50 μM) and N-phenyl-N'-1,2,3-thidiazol-5-ylurea (thidiazuron, TDZ) (0.1–10 μM). The optimal concentrations for bud induction were 25 μM BAP and 1 μM TDZ leading to 87 and 72 % of responsive tTCLs and 24 and 15 buds per tTCL, respectively. A higher percentage of responsive tTCLs and a higher frequency of bud regeneration were obtained with BAP and TDZ combined. With a combination of 10 μM BAP and 1 μM TDZ, 90 % of responsive tTCLs forming 37 buds per tTCL were obtained. Shoot elongation occurred after a transfer onto a medium containing 1 μM GA 3. Rooting of individual shoot was induced using 5 μM NAA. One hundred per cent of rooted shoots developed normally after transfer to the greenhouse; no phenotype variation was observed. High numbers of regenerated viable plants can be produced directly without callus formation from tTCL after 9 weeks of culture. Une régénération intense et directe de bourgeons obtenus in vitro à partir de couches cellulaires minces transversales (CCMts) pratiquées sur de jeunes entrenœuds de Poncirus trifoliata âgés d'un an est décrite. Les milieux de culture contenant de la 6-benzylaminopurine (BAP) (de 1 à 50 μM), et de la N-phényl-N'-1,2,3-thidiazol-5-ylurée (thidiazuron, TDZ) (de 0,1 à 10 μM) seules ou en combinaisons ont été testés. Quatre-vingt-sept pourcent et 72 % de CCMt formant 24 et 15 bourgeons par explant sont obtenus respectivement avec 25 μM de BAP et 1 μM de TDZ. Avec une combinaison de BAP (10 μM) et TDZ (1 μM), le pourcentage et la densité de régénération sont plus élévés : 90 % et 37 bourgeons par CCMt. L'élongation des bourgeons est obtenue après un transfert sur un milieu contenant 1μM d'acide gibbérellique (GA 3) ; l'enracinement des pousses feuillées ainsi obtenues se produit 5 semaines après un transfert sur un milieu contenant 5 μM d'acide a-napthalène acétique (ANA). Cent pour cent des pousses enracinées se développent vigoureusement en serre sans anomalie morphologique. Un grand nombre de plantes viables peuvent ainsi être régénérées directement sans formation de cal intermédiaire à partir de CCMt après 9 semaines de mise en culture.