Étude du méthionine-tARN dans la glande mammaire de brebis. Hétérogénéité et purification

• Published in: Biochimie Vol. 53; no. 4; pp. 523 - 531
• Main Author: Petrissant, G.
• Format: Journal Article
• Language: French
• Published: Elsevier Masson SAS 28.07.1971
• Subjects: RPC; G. M; MTS; GSH; MAK; BD-cellulose
• ISSN: 0300-9084; 1638-6183
• DOI: 10.1016/S0300-9084(71)80170-0

The heterogeneity of methionine-tRNA in sheep mammary gland has been studied by several chromatographic techniques. Three acceptors have been demonstrated; only one among them is acylated by methionyl-tRNA synthetase from E. coli, and may be purified by successive chromatography on columns of BD-cellulose and DEAE-Sephadex A 50. The mixture of the two other isoacceptors was purified by phenoxyacetylation, after enrichment by means of the chromatographic techniques mentioned above. The specific activity of the samples obtained was greater than 1,200 pmoles of methionine per unit of absorbance in both cases. Methionyl-tRNA of E. coli ( 14C) and of mammary gland ( 3H) were hydrolysed by RNase T 1 ; by means of chromatography of the hydrolysates on a DEAE-cellulose column in the presence of urea, it is possible to differenciate the 3′-terminal oligonucleotides corresponding to the tRNA Met m E. coli and tRNA Met II M. G.. The partial separation of the 3H and 14C radioactivities in the case of the oligonucleotides derived from methionyl tRNA Met f E. coli and tRNA Met I M. G. argues in favour of a difference in the 3′-terminal sequence of these two tRNAs. L'hétérogénéité du méthionine-tARN dans la glande mammaire de Brebis a été étudiée par diverses techniques chromatographiques. Trois isoaccepteurs ont été mis en évidence ; un seul d'entre eux est acylé par la méthionyl-tARN-synthétase de E. coli ; il peut être purifié par chromatographies successives sur colonnes de BD-cellulose et de DEAE-Sephadex A 50. Le mélange des deux autres sous-espèces, après enrichissement par les mêmes techniques, est purifié par phénoxyacétylation. Dans l'un et l'autre cas, l'activité spécifique des échantillons obtenus est supérieure à 1 200 pmoles de méthionine par unité d'absorbance. Les méthionyl-tARN de E. coli ( 14C) et de glande mammaire ( 3H) sont hydrolysés par la RNase T 1 ; la chromatographie des hydrolysats sur colonne de DEAE-cellulose en présence d'urée permet de différencier les oligonucléotides 3′-terminaux correspondant aux tARN Met m E. coli et Met II G. M.. Le décalage existant entre les radioactivités 3H et 14C dans le cas des oligonucléotides dérivés des tRNA Met f E. coli et Met I G. m. permet de conclure à une différence dans les séquences 3′-terminales de ces deux molécules. Die Heterogeneität der Methionin-tRNS in der Milchdrüse des Schafes wurde durch verschiedene chromatographische Verfahren untersucht. Drei Isoakzeptoren wurden nachgewiesen ; darunter wird ein einziger durch die Methionyl-tRNS synthetase von E. coli acyliert ; er kann durch aufeinanderfolgende Säulenchromatographien mit BD-Zellulose und DEAE-Sephadex A 50 gereinigt werden. Die Mischung der zwei anderen Isoakzeptoren wird nach Anreicherung durch dieselben Verfahren durch Phenoxyacetylierung gereinigt. In beiden Fällen liegt die spezifische Aktivität der ermittelten Proben höher als 1200 pmoles von Methionin/A 260. Methionyl tRNS von E. coli ( 14C) und der Milchdrüse ( 3H) werden durch die T 1 RNase hydrolysiert ; mittels der Chromatographie des Hydrolysats auf DEAE-Zellulose Saülen, in Gegenwart von Harnstoff, kann man die radioaktiven Oligonukleotide der tRNS Met m E. coli und tRNS Met II Milchdrüse trennen. Was die von tRNS Met I Milchdrüse und tRNS Met f E. coli herkommenden Oligonukleotide betrifft, ist die Ubereinanderlegung der 3H und 14C Radioaktivitäten nicht vollständig genug, um die Strukturähnlichkeit zwischen diesen beiden Molekülen festzustellen.