Galactosyltransferase activities in subcellular fractions of two YC8 lymphoma cell variants: does a relationship exist between antigenic determinants and acceptor sites for galactose?

• Published in: Biochimie Vol. 60; no. 11; pp. 1273 - 1282
• Main Authors: Barel, Monique, Dahan, Auriel, Morel, Evelyne
• Format: Journal Article
• Language: English
• Published: Elsevier Masson SAS 08.02.1979
• Subjects: Galactosyltransferase acceptor sitesantigenic determinants; YC8 lymphoma; YC8 lymphoma; Galactosyltransferase acceptor sitesantigenic determinants
• ISSN: 0300-9084; 1638-6183
• DOI: 10.1016/S0300-9084(79)80444-7

Nous avons essayé de relier les différences physiologiques observées dans 2 variants P et L du lymphome murin YC8 avec certaines de leurs propriétés immunologiques et enzymatiques. Les 2 lignées répondent différement l'une de l'autre vis-à-vis d'un sérum antilymphocytaire et d'un antisérum spécifique du virus de Moloney. Les fractions A (d: 1,14/1,16), obtenues par fractionnements cellulaires, possèdent les plus fortes activités ATPase activée par Na +et K +, inhibée par l'ouabaïne et galactosyltransferase. Nous avons étudié certaines propriétés de ce dernier enzyme. L'activité optimale est obtenue dans les mêmes conditions de pH et de concentration en ions Mn 2+ pour les 2 lignées cellulaires. Au contraire, on a trouvé des paramètres cinétiques différents en ce qui concerne le sucre donneur (UDP-galactose) sur des accepteurs endogènes ou exogènes (ovomucoïde). Le Km apparent sur des accepteurs endogènes pour l'UDP-galactose est 1,7 × 10 −6 M (cellules P) et 3,3 × 10 −6 M (cellules L), avec le V max cellules P < V max cellules L; il est de 0.61 × 10 −6 M, pour les 2 lignées, sur l'ovomucoïde. Ces résultats suggèrent la présence, sur les cellules L, d'un plus grand nombre de sites accepteurs, la plus grande affinité des cellules P pour l'UDP-galactose étant équilibrée par un plus petit nombre de sites accepteurs endogènes. Quand on ajoute l'ovomucoïde, les sites accepteurs endogènes sont négligeables. Le Km apparent pour l'ovomucoïde est 8,6 × 10 −5 M (cellules P) et 4,3 × 10 −5 M (cellules L). Ces résultats appuient l'hypothèse énoncée ci-dessus. L'enzyme des cellules L serait plus rapidement saturé que celui des cellules P à cause d'un plus grand nombre de sites accepteurs endogènes sur les cellules L. Ce caractère de la cellule L, de même que son comportement immunologique pourraient être quelques unes des modifications transformant la cellule P en cellule L. Experiments have been undertaken to correlate physiological changes, observed in two YC8 cells variants (P and L) and some of their immunological and enzymatic properties. These cell lines show different responses towards antilymphocyte and anti-Moloney sera. Subcellular fractionations have been made. The A fractions (d: 1.14/1.16) have the highest ouabain-inhibited Mg 2+-stimulated (Na +-K +)-dependent ATPase and galactosyltransferase activities. Some properties of the latter enzyme have been studied: whereas optima pH and requirements for Mn 2+ ions have been found to be the same for both cell line enzymes, on the contrary, different kinetic parameters have been shown with respect to sugar donor (UDP-galactose) on endogeneous or exogeneous (ovomucoid) acceptors. Apparent Km for UDP-galactose is 1.7 × 10 −6 M (P-cells) and 3.3 × 10 −6 M (L-cells), on endogeneous acceptors, and P-cell V max < L-cell V max; on ovomucoid it is 0.61 × 10 −6 M, for both cell lines. These results suggest the presence on L-cells of more endogeneous acceptor sites, the higher affinity of P-cells for UDP-galactose being balanced by less endogeneous acceptor sites for galactose. When ovomucoid is added, galactose transfer on endogeneous acceptor sites of both cells is negligible. Apparent Km for ovomucoid is 8.6 × 10 −5 M (P-cells) and 4.3 × 10 −5 M (L-cells). These data support the above-mentioned hypothesis: L-cell enzymes would be more rapidly saturated than P-cell enzymes because of the higher number of endogeneous sites on L-cells. This supposed acquired character of L-cells as well as their immunological behaviour could explain the modified properties of L-cells as compared to P-cells.