Design and validation of analytical methods for quantitative determination of active ingredients in extemporal combined medicine in spray form

• Published in: ScienceRise: pharmaceutical science (Online) no. 6(46); pp. 31 - 40
• Main Authors: Cherniakova, Valeriia, Myhal, Artem, Rudiuk, Vitalii, Studenyak, Yaroslav, Kryvanych, Oleksandr, Bevz, Nataliia, Georgiyants, Victoriya
• Format: Journal Article
• Language: English
• Published: 31.12.2023
• ISSN: 2519-4844; 2519-4852
• DOI: 10.15587/2519-4852.2023.294919

The aim of the work was the development and study of the validation characteristics of the method of quantitative determination of phenylephrine hydrochloride, nitrofural and diphenhydramine hydrochloride when they are simultaneously present in an extemporaneous combined medicinal product in the form of a spray using liquid chromatography method. Materials and methods. Agilent 1260 liquid chromatographs, equipped with a diode-matrix and UV detector from the company "Agilent technologies", USA. Chromatographic columns 250×4.6 mm filled with octadecylsilyl silica gel for chromatography (Zorbax StableBond SB-Aq, Agilent company), mobile phase - 0.1 % aqueous solution of trifluoroacetic acid R - methanol R, elution mode - gradient; mobile phase speed – 1.2 ml/min; the detection wavelength is 220 nm. Results. The determined chromatographic conditions ensure proper separation of the peaks of the substances to be determined: phenylephrine hydrochloride, nitrofural and diphenhydramine hydrochloride in their joint presence, and do not have a negative effect on the quantitative assessment of their content. Validation tests were conducted to confirm the suitability of the analytical method for the performance of the task - control of the quantitative content of active substances in the combined medicinal product in the form of a spray. The determined validation characteristics indicate that the method is characterized by appropriate specificity, linearity, correctness and convergence in the range of application for phenylephrine hydrochloride (range 0.499-0.749 mg/ml, ΔZ=0.44 ≤ max ΔZ=3.20, d=0.22 ≤ max d=1.02, a=0.01  max a=5.1, r = 0.9997  min r= 0.9924), nitrofural (range 0.154-0.231 mg/ml, ΔZ=0.44 ≤ max ΔZ=3.20, d=0.62 ≤ max d=1.02, a=0.0006  max a=5.1, r = 0.9996  min r= 0.9924) and diphenhydramine hydrochloride (range 0.499-0.749 mg/ml, ΔZ=0.50 ≤ max ΔZ=3.20, d=0.05 ≤ max d=1.02, a=0.076  max a=5.1, r = 0.9999  min r= 0.9924). Conclusions. An analytical technique for the quantitative determination of phenylephrine hydrochloride, nitrofural and diphenhydramine hydrochloride when simultaneously present in an extemporaneous combined medicinal product in the form of a spray by the method of high-performance liquid chromatography was developed. The determined validation parameters confirm the correctness of the methodology. The proposed HPLC technique was used to study the chemical stability of the spray for the treatment of allergic rhinitis Метою роботи є розробка і вивчення валідаційних характеристик методики кількісного визначення фенілефрину гідрохлориду, нітрофуралу та дифенгідраміну гідрохлориду при сумісній присутності в екстемпоральному комбінованому лікарському засобі у формі спрею методом рідинної хроматографії. Матеріали і методи. Рідинні хроматографи Agilent 1260, обладнані діодно-матричним та УФ-детектором фірми «Agilent technologies», США. Колонки хроматографічні розміром 250×4,6 мм, що заповнена силікагелем октадецилсилільним для хроматографії (Zorbax StableBond SB-Aq, фірми «Agilent»), рухома фаза – 0,1 % водний розчин трифтороцтової кислоти Р – метанол Р, режим елюювання – градієнтний; швидкість рухомої фази – 1,2 мл/хв; довжина хвилі детектування – 220 нм. Результати. Визначені умови хроматографування забезпечують належне розділення піків визначуваних речовин: фенілефрину гідрохлориду, нітрофуралу та дифенгідраміну гідрохлориду у спільній присутності, та не чинять негативного впливу на кількісну оцінку їх вмісту. Для підтвердження придатності аналітичної методики для виконання поставленої задачі – контролю кількісного вмісту діючих речовин у комбінованому лікарському засобі у формі спрею – було проведено валідаційні випробування. Визначені валідаційні характеристики свідчать про те, що методика характеризується належною специфічністю, лінійністю, правильністю та збіжністю в діапазоні застосування для фенілефрину гідрохлориду (діапазон 0.499-0.749 мг/мл, ΔZ=0.44 ≤ max ΔZ=3.20, d=0.22 ≤ max d=1.02, a=0.01  max a=5.1, r = 0.9997  min r= 0.9924), нітрофуралу (діапазон 0.154-0.231 мг/мл, ΔZ=0.44 ≤ max ΔZ=3.20, d=0.62 ≤ max d=1.02, a=0.0006  max a=5.1, r = 0.9996  min r= 0.9924) та дифенгідраміну гідрохлориду (діапазон 0.499-0.749 мг/мл, ΔZ=0.50 ≤ max ΔZ=3.20, d=0.05 ≤ max d=1.02, a=0.076  max a=5.1, r = 0.9999  min r= 0.9924). Висновки. Розроблено аналітичну методику кількісного визначення фенілефрину гідрохлориду, нітрофуралу та дифенгідраміну гідрохлориду при сумісній присутності у екстемпоральному комбінованому лікарському засобі у формі спрею методом високоефективної рідинної хроматографії. Визначені валідаційні параметри підтверджують коректність методики. Запропонована методика ВЕРХ використана для вивчення хімічної стабільності спрею для лікування алергічного риніту