Dosage du cortisol libre urinaire par chromatographie liquide

• Published in: Immuno-analyse & biologie spécialisée Vol. 20; no. 3; pp. 186 - 190
• Main Authors: Brau, M., Banse, V., Dupret, P., Ledant, T., Boudry, P.
• Format: Journal Article
• Language: French
• Published: Paris Elsevier SAS 01.06.2005; Elsevier
• Subjects: CLHP; Comparaison méthode; Cortisol libre; Free cortisol; HPLC; Hydrocortisone; Immunologie fondamentale; Method comparison; Sciences biologiques et medicales; Sciences biologiques fondamentales et appliquees. Psychologie; Sciences medicales; Techniques d'exploration et de diagnostic (generalites); Urine; Urines; Urine; Urines; Comparaison méthode; Method comparison; Cortisol libre; Hydrocortisone; CLHP; HPLC; Free cortisol; Immunopathologie; Antiinflammatoire; Analyse quantitative; Cortisol; Corticostéroïde; Dosage; Méthode; Glucocorticoïde; Hormone surrénalienne; Immunologie; Chromatographie phase liquide; Forme libre; Etude comparative; Biologie clinique; Hormone stéroïde
• ISSN: 0923-2532; 1878-1365
• DOI: 10.1016/j.immbio.2005.03.004

Au sein de notre laboratoire, une technique de dosage spécifique du cortisol libre urinaire a été développée en chromatographie liquide en utilisant la méthylprednisolone comme standard interne. L'échantillon subit préalablement une double extraction liquide–liquide suivie par une extraction sur phase solide (SPE) C-18 afin de purifier au maximum l'extrait. Les composés sont séparés sur une colonne Zorbax Eclipse ® XDB-C18 avec une phase mobile constituée d'eau et d'acétonitrile. La linéarité, la précision, le rendement et l'exactitude ont été étudiés. La limite de quantification est de 5 ng/mL en cortisol, les CV sont inférieurs à 8 %. Notre méthode a d'abord été comparée avec une technique immunologique chemiluminescente (Advia-Centaur), ensuite vis-à-vis d'un laboratoire de référence. Les résultats obtenus en immunologie ont montré une surestimation de l'excrétion du cortisol libre par rapport à la méthode chromatographique. L'évaluation par rapport à un laboratoire de référence s'est montrée satisfaisante. À l'issue de l'étude, la technique chromatographique nous a amené à restreindre l'intervalle des valeurs physiologiques normales de 3,9 à 58,5 μg/24 heures. In our laboratory, a specific assay technique of urinary free cortisol was developed in liquid chromatography using methylprednisolone as the internal standard. Before the chromatography, sample were extracted with double extraction liquid-liquid followed by C18 solid-phase extraction. The compounds were separated on a Zorbax Eclipse ® XDB-C18 column with a mobile phase of water–acetonitrile. Linearity, precision, recovery and accuracy of the method were established. The limit of quantification was 5 ng/mL of cortisol, and the total coefficients of variation were <8%. The chromatography method was compared first with an automated immunoassay using chemiluminescent label (Advia-Centaur ®) then with a reference laboratory. The results obtained in immunology showed an over-estimate of the excretion of free cortisol compared to the chromatographic method. The evaluation compared to the reference was satisfactory. At the end of study, the chromatographic technique allowed us to reconsider the reference range of normal cortisol excretion from 3.9 to 58.5 μg/24 hours.