Purification et caractérisation d'une protéase extracellulaire de Staphylococcus aureus inhibée par l'E.D.T.A

• Published in: Biochimie Vol. 58; no. 7; pp. 793 - 804
• Main Author: Saheb, Samir A.
• Format: Journal Article
• Language: French
• Published: Elsevier Masson SAS 01.09.1976
• Subjects: S.D.S; E.G.T.A; E.D.T.A; D.E.A.E; Tris
• ISSN: 0300-9084; 1638-6183
• DOI: 10.1016/S0300-9084(76)80310-0

A neutral protease, produced by Staphylococcus aureus, strain V8, was purified by precipitation with ammonium sulfate and acetone, and by chromatography on D.E.A.E.-cellulose. The purified protein is homogeneous by acrylamide gel electrophoresis. The molecular weight of the enzyme is estimated to be 28.000 daltons by gel filtration and 27.400 daltons by sedimentation equilibrium study. The amino acid composition indicates 251 residues and the absence of sulphydryl groups. Arginine is the NH2-terminal amino acid, while the COOH-terminal sequence of amino acids is Ala-Gly-Leu-Gl-Val. The protease exhibits a maximum proteolytic activity on casein at pH 7,0, and its activity is increased by 30 per cent on the addition of calcium ions. E.D.T.A. and E.G.T.A. completely inhibit the protease while the reagents of serine enzymes are without effect. This enzyme, which contains mainly calcium in its molecule, hydrolyses the peptide bonds, of the insulin B-chain, in which the amino groups of hydrophobic amino acids are involved. Unlike the other metalloproteases, no hydrolysis is observed for the peptide bond Phe(24) - Phe(25) while the peptide bond Phe(1) - Val(2) is attacked. Une protéase neutre, synthétisée par la souche V8 de Staphylococcus aureus, a été purifiée par précipitation par le sulfate d'ammonium et l'acétone et par chromatographie sur D.E.A.E.-cellulose. La protéine purifiée est homogène par électrophorèse en gel de polyacrylamide. L'enzyme a un poids moléculaire de 28.000 daltons, déterminé par filtration sur gel, et de 27.400 daltons déterminé par sédimentation à l'équilibre. La composition en acides aminés indique la présence de 251 résidus et l'absence de groupements sulfhydryls. L'arginine est l'acide aminé N-terminal et la séquence des acides aminés C-terminaux est Ala-Gly-Leu-Gl-Val. Cette protéase possède un pH optimal de 7,0 sur la caséine, et son activité est augmentée de 30 p. cent en présence des ions calcium. L'E.D.T.A. et l'E.G.T.A. inhibent complètement cette protéase alors que les réactifs d'enzymes à groupements sérine sont sans action. Cette enzyme, qui contient principalement du calcium dans sa molécule, scinde les liaisons peptidiques de la chaîne B de l'insuline, dans lesquelles les acides aminés hydrophobes participent par leur groupement aminé. Toutefois, contrairement aux autres métalloprotéases, elle ne scinde pas la liaison Phe(24) - Phe(25) alors que la liaison Phe(1) - Val(2) est attaquée.