Test visuel rapide de génotypage érythrocytaire

• Published in: Transfusion clinique et biologique : journal de la Société française de transfusion sanguine Vol. 26; no. 3; p. S95
• Main Authors: Gomez-Martinez, Julien, Silvy, Monique, Chiaroni, Jacques, Fournier-Wirth, Chantal, Roubinet, Francis, Bailly, Pascal, Brès, Jean-Charles
• Format: Journal Article
• Language: French
• Published: Elsevier Masson SAS 01.09.2019
• ISSN: 1246-7820
• DOI: 10.1016/j.tracli.2019.06.203

L’hémagglutination est la technique de référence pour la détermination d’un phénotype érythrocytaire. Néanmoins, cette technique sérologique présente des limites, et plus particulièrement dans certaines situations où le phénotypage érythrocytaire des patients ne peut être réalisé. Dans ce contexte, la détermination d’un génotype par biologie moléculaire permet d’obtenir un phénotype déduit pour le patient et ainsi de prévenir les risques d’allo-immunisation anti-érythrocytaire ou de limiter le risque d’incident transfusionnel. Pour répondre à cette problématique, nous avons développé un test moléculaire rapide et innovant permettant de déduire visuellement le phénotype étendu dans le cadre de la prise en charge transfusionnelle du patient. Cette technologie repose sur la co-amplification par PCR multiplexe de plusieurs fragments d’ADN génomique directement à partir de sang total, et sur l’utilisation d’un support type membrane Lateral-Flow pour la lecture visuelle des résultats. Les amplicons biotinylés et les réactifs de révélation migrent par capillarité dans la membrane. L’apparition de spots colorés, résultant de l’hybridation des amplicons biotinylés complexés avec les nanoparticules d’or et des sondes greffées sur la membrane, indique la présence des allèles correspondants. L’absence de coloration traduit l’absence des allèles concernés. Nous présentons les résultats de l’évaluation de cette technologie sur un panel d’échantillons de donneurs. Les résultats obtenus montrent que notre technologie brevetée, permet de déduire un phénotype érythrocytaire en une heure, pour six antigènes d’intérêt (JK1/JK2, FY1/FY2/FY2null et MNS3/MNS4).