細菌性葉斑病菌Pseudomonas cichorii專一性引子之開發

• Published in: 植物病理學會刊 Vol. 15; no. 4; pp. 275 - 285
• Main Authors: 許秀惠(S. H. Hseu), 申屠萱(H. Shentue), 林俊義(C. Y. Lin)
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 台灣 中華民國植物病理學會 01.12.2006
• Subjects: PCR引子; 向日葵; 細菌性葉斑病菌; PCR引子; 向日葵; 細菌性葉斑病菌
• ISSN: 1021-9544
• DOI: 10.6649/PPB.200612_15(4).0007

以60個逢機引子應用隨機增幅多型性核酸技術(RAPD)增幅並篩選出對細菌性葉斑病菌Pseudomonas cichorii (Swingle) Stapp特有之1,100 bp的專一性片段，進一步將該片段接入Topo載體pCR(上标 @)Ⅱ-TOPO得到選殖株，並分析其核酸序列，再根據其序列設計出對Pseudomonas cichorii具專一性之引子對SfL1/SfR2。應用此引子對進行聚合酵素連鎖反應(polymerase chain reaction，PCR)，其對供試向日葵細菌性葉斑病菌皆能增幅出379 bP的片段，但對供試之6屬21種其他非標的之病原菌及雜菌菌株則不會產生任何片段。當以引子對SfL1/SfR2測試細菌性葉斑病菌P. cichorii之全DNA時，其靈敏度可偵測到5~10pg，而用於偵測其細菌數之靈敏度則可以測到5.5~9個活菌數。將向日葵細菌性葉斑病菌(P. cichorii)10^6cfu/ml菌液與其他細菌菌株之菌液10^5~10^8cfu/ml混合，再以引子對SfL1/SfR2進行聚合酵素連鎖反應，結果顯示不影響其對P. cichorii之偵測效率。應用單一菌落快速檢定法可於3~4hr內鑑定向日葵細菌性葉斑病菌，該引子對可用於人工接種葉斑病菌之向日葵植株樣品之偵測，因此確認所設計之引子對SfL1/SfR2可用於快速鑑定及診斷細菌性葉斑病菌P. cichorii。