Multiplex PCR法を用いた組換えトウモロコシ5系統からの組換え遺伝子の検知法

• Published in: Shokuhin eiseigaku zasshi Vol. 42; no. 1; pp. 24 - 32
• Main Authors: 松岡, 猛, 栗原, 秀夫, 穐山, 浩, 三浦, 裕仁, 合田, 幸広, 日下部, 裕子, 一色, 賢司, 豊田, 正武, 日野, 明寛
• Format: Journal Article
• Language: Japanese
• Published: 公益社団法人 日本食品衛生学会 2001
• ISSN: 0015-6426; 1882-1006
• DOI: 10.3358/shokueishi.42.24

我が国で食品, 飼料用として輸入可能な組換えトウモロコシ7系統のうち, 5系統からの組換え遺伝子の検知を, 既報のMultiplex PCR法に改良を加えて行った. ゲノムDNAの抽出は実験時間が短縮でき, 研究室・環境への安全性で優れているスピンカラムを用いる方法で行った. 組換えトウモロコシに導入されているDNA塩基配列を解析し, 各組換え系統とトウモロコシに内在的にあるzein遺伝子を1回のPCRで特異的かつ確実に特定でき, トウモロコシ, ダイズ, コメ, コムギ, オオムギに対してfalse positiveなバンドが見られないプライマーの設計を行った. 非組換え体に組換え体5系統を混合しMultiplex PCRを行うと, 各組換え系統に特異的な長さのバンドが観察できた. 本法による検知感度を非組換え体粉砕物に5系統の組換え体粉砕物を混合して調べたところ, 0.5%程度であった.