稳定转染hCysLT2受体的HEK293细胞株的构建及其受体拮抗剂的初筛

• Published in: 浙江大学学报（医学版） Vol. 40; no. 2; pp. 123 - 130
• Main Authors: 林卡娜, 王欣欣, 黄雪琴, 蔡蓓蕾, 方三华, 卢韵碧, 张纬萍, 魏尔清
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 浙江大学医学院药理学系,浙江杭州,310058 2011
• Subjects: 半胱氨酰白三烯; 细胞内钙; 白三烯拮抗剂; 半胱氨酸; 受体,白三烯; HEK293细胞
• ISSN: 1008-9292
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2011.02.002

Q256%Q421; 目的:构建稳定转染hCysLT2受体的HEK293细胞株,并初筛具有hCysLT2受体拮抗活性化合物.方法:采用Lipofectamine 2000将质粒pcDNA3.1(+)-hCysLT2转染至HEK293细胞中,用96孔板有限稀释法挑选阳性单克隆细胞株,以RT-PCR和免疫荧光法检测hCysLT2基因的表达.稳定表达hCysLT2受体的HEK293细胞株,以激动剂LTD4诱导细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)增高为指标,初步筛选有拮抗作用的化合物.结果:转染后的HEK293细胞中挑选12个单克隆细胞株,11株高表达hCysLT2受体.阳性刺激物ATP为50 μmol/L及LTD4 100 nmol/L能升高[Ca2+]i.AP-2100984抑制LTD4诱导的hCysLT2-HEK293细胞[Ca2+]i升高,CysLT1受体选择性拮抗剂无抑制作用.新合成化合物DXW2、DXW3、DXW4、DXW5、DXW9、DXW25、DXW26、DXW29、DXW35在1 μmol/L能显著抑制LTD4引起的[Ca2+]i升高,其中DXW4和DXW5的IC50分别为0.25 μmoL/L和7.5 μmol/L.结论:成功构建稳定转染hCysLT2受体的HEK293细胞株,并可用于有拮抗活性化合物的筛选.