左归丸上调ALKBH5对小鼠BMSCs成骨分化的作用

• Published in: 中国骨质疏松杂志 Vol. 29; no. 12; pp. 1744 - 1762
• Main Authors: 刘慧雯, 刘昊, 尚奇, 陈桂锋, 陈弘林, 伍子贤, 余富勇, 颜先伟, 秦威城, 沈耿杨, 任辉, 江晓兵
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 广州中医药大学,广东 广州 510405 2023; 广州中医药大学岭南医学研究中心,广东 广州 510405%广州中医药大学,广东 广州 510405%黔西南州中医医院,贵州 黔西南州 562499%广州医科大学附属第二医院,广东 广州 510260
• Subjects: 左归丸; ALKBH5; osteogenic differentiation; 骨髓间充质干细胞; 成骨分化; N6-methyladenosine; ZGW; N6-甲基腺苷; bone marrow mesenchymal stem cells
• ISSN: 1006-7108
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-7108.2023.12.005

R285.5; 目的 基于去甲基化酶ALKBH5 探讨左归丸对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用.方法 体外分离培养小鼠BMSCs,将 3～5 代细胞随机分成:①成骨诱导 0、3、7 d;②空白组(CON)、左归丸组(ZGW,1000 μg/mL);③使用小干扰RNA(siRNA)转染小鼠BMSCs,构建ALKBH5 沉默的小鼠BMSCs,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测沉默效率,而后将细胞分成对照组(si-NC)、左归丸组(si-NC+ZGW)、沉默组(si-ALKBH5)、沉默+左归丸组(si-ALKBH5+ZGW).以碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红(ARS)染色法检测各组 BMSCs成骨分化水平与矿化能力;RT-qPCR检测各组成骨分化相关因子 COL1A1、BMP4、Osx 以及去甲基化酶 ALKBH5 的 mRNA 表达水平;通过免疫印迹法(Western-blot)检测各组BMSCs中成骨相关蛋白Runx2、BMP4、BMP2 以及ALKBH5 的蛋白表达水平.结果 小鼠BMSCs成骨分化过程中,ALKBH5 mRNA和蛋白表达均上调.左归丸能够上调ALKBH5 的蛋白表达水平,上调成骨相关蛋白Runx2、BMP2 的表达,促进小鼠BMSCs成骨分化.使用siRNA沉默ALKBH5 后,Runx2、Osx的mRNA表达和蛋白表达均下调,左归丸干预ALKBH5 沉默细胞逆转了ALKBH5 的蛋白表达下调,Runx2、BMP2 相应表达上调,成骨分化能力下降被抑制.结论 小鼠BMSCs成骨分化过程中ALKBH5 去甲基化酶的表达水平上调.左归丸上调ALKBH5 促进小鼠BMSCs成骨分化.