异种移植抗原α-gal介导人血清杀伤A549细胞的实验研究

• Published in: 中国肺癌杂志 Vol. 15; no. 11; pp. 630 - 637
• Main Authors: 朱圣明, 谢玲, 郑鸿, 秦凤, 刘美, 骆志国, 王艳萍
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 湖北医药学院附属太和医院肿瘤科,十堰,442000%湖北医药学院附属太和医院皮肤科,十堰,442000%四川大学华西医院肿瘤分子诊断研究室,成都,610041 2012
• Subjects: 异种抗原; α-半乳糖基; α1,3-GT基因; A549细胞
• ISSN: 1009-3419
• DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2012.11.05

R734.2; 背景与目的 人体α-1,3半乳糖基转移酶(α-1,3 Galactosyltransferase,α-1,3GT)基因功能失活而不表达α-半乳糖基(α-galactosyl,α-gal)表位,但天然存在着大量抗α-gal抗体,异种器官移植研究结果提示,在人肿瘤细胞上重新表达异种移植抗原α-gal,可能诱发类似于宿主抗移植物超急性排斥反应的抗肿瘤效应.本研究通过基因导人手段,建立稳定表达异种移植抗原α-gal的转基因人肺癌细胞系,探讨α-gal介导的人血清抗肿瘤的可能性及其机制方法 将前期成功构建的α-1,3GT基因真核表达质粒pEGFP-N 1-GT瞬时转染人肺腺癌细胞A549,筛选并建立稳定的转基因细胞系A549-GT.MTT增殖实验和显微镜观察转基因细胞生物学特性变化;RT-PCR检测A549-GT中α-1,3GT基因mRNA表达;荧光素标记的凝集素(FITC-BS-IB4 lectin)染色检测α-1,3GT在肿瘤细胞表面合成α-gal的能力;A549-GT细胞及其培养基分别与正常人细胞共培养,检验α-1,3GT基因的稳定性和酶活性的稳定性;人血清结合实验检测A549-GT与IgM和补体C3结合情况.结果 RT-PCR检测到转基因细胞系A549-GT中有α-1,3GT mRNA表达.荧光显微镜和流式细胞术检测结果显示:A549-GT能够长期稳定表达异种移植抗原α-gal表位;A549-GT与其亲本细胞在生长形态及增殖速度上无明显差异;A549-GT细胞及其培养基分别与正常人胚肺成纤维细胞MRC-5共培养均不能使MRC-5获得α-gal合成能力;经人血清处理后,荧光免疫实验观察到转基因细胞系A549-GT能与血清抗体IgM结合并诱导补体C3结合.结论 异种移植抗原α-gal在肿瘤细胞上的重新表达,可能通过补体依赖的细胞毒机制,介导类似于异种器官移植排斥反应的抗肿瘤效应.