生长分化因子11(GDF11)调节非酒精性脂肪性肝病的机制研究 - 张涛; 殷雪翠; 任飞飞; 董琳; 张佳; 卢高峰 (临床肝胆病杂志, 2023)
目的 探讨生长分化因子11(GDF11)对游离脂肪酸(FFA)诱导的肝细胞脂肪变性的影响,并探讨自噬在该过程中的作用.方法 体外建立非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型,加入重组GDF11,观察其对肝细胞脂肪变性及凋亡的影响;加入氯喹抑制自噬,探究GDF11对肝细胞自噬流的改变及其与脂肪变性的关系.AM-12细胞分为5组:对照组、对照+GDF11组、模型组、GDF11组和GDF11+氯喹组.对照组:DMEM完全培养基培养细胞;对照+GDF11组:在完全培养基的基础上加入GDF11(100 ng/mL);模型组:浓度为1 mmol/L的FFA(油酸∶棕榈酸=2∶1)诱导NAFLD模型;GDF11组:细胞中同时加入FFA和GDF11;GDF11+氯喹组:细胞中同时加入FFA、GDF11和浓度为20 μmol/L的氯喹(自噬抑制剂).使用脂滴荧光染色和全自动生化分析仪观察肝细胞内脂质沉积情况,蛋白免疫印迹法及蛋白免疫荧光检测自噬相关蛋白(p62、LC3B)水平,观察细胞自噬水平;JC-1染色检测线粒体膜电位.多组间计量资料比较用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 与模型组比较,GDF11组与对照组肝细胞内脂滴积累明显减少,脂滴体积明显减小(P值均＜0.01).模型组肝细胞内甘油三酯水平明显高于GDF11组和对照组(P值均＜0.0001).模型组LC3B水平较对照组与GDF11组低(P值均＜0.05),p62水平高(P值均＜0.05);与GDF11组比较,GDF11+氯喹组细胞内甘油三酯含量升高(P＜0.001);与模型组比较,GDF11组ROS含量明显减少(P＜0.05).FFA诱导过后,胞质中的绿色荧光明显升高,与对照组比较,模型组JC-1单体/多聚体升高(P＜0.0001),细胞线粒体膜电位下降;加入GDF11后,绿色荧光强度减弱,与模型组比较,GDF11组JC-1单体/多聚体下降(P＜0.05),线粒体膜电位回升.结论 GDF11可以改善FFA诱导的脂毒性肝损伤,并通过促进细胞自噬来改善NAFLD中肝细胞脂肪变性.