ame-miR-79负调控意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道中靶基因CYP450和FG的表达

• Published in: 昆虫学报 Vol. 65; no. 10; pp. 1256 - 1265
• Main Authors: 张凯遥, 刘佳美, 张文德, 胡颖, 康育欣, 王紫馨, 王思懿, 钱加珺, 赵萧, 张佳欣, 陈大福, 郭睿, 付中民
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 福建农林大学动物科学学院(蜂学学院),福州350002%福建农林大学动物科学学院(蜂学学院),福州350002 2022; 福建农林大学蜂疗研究所,福州350002
• Subjects: 意大利蜜蜂; 肠道; 幼虫; miRNA; ame-miR-79; 发育; 靶基因
• ISSN: 0454-6296
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2022.10.002

S891; [目的]本研究旨在通过饲喂ame-miR-79的模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica工蜂幼虫肠道内的ame-miR-79分别进行过表达和敲减,探究ame-miR-79对幼虫肠道内靶基因表达的调控作用.[方法]通过分子克隆与Sanger测序验证意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内ame-miR-79的序列真实性.通过饲喂mimic-miR-79和inhibitor-miR-79对意大利蜜蜂工蜂4-6日龄幼虫肠道内的ame-miR-79分别进行过表达和敲减.采用相关生物信息学软件进行ame-miR-79的靶基因预测与分析.通过RT-qPCR检测ame-miR-79的过表达和敲减效果及过表达和敲减ame-miR-79后靶基因的相对表达量.[结果]ame-miR-79在意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内真实存在.与无义模拟物(nonsense mimic,mimic-NC)组相比,mimic-miR-79组的4-6日龄幼虫肠道内ame-miR-79的表达量皆极显著上调;与无义抑制物(nonsense inhibitor,inhibitor-NC)组相比,inhibitor-miR-79组的4和5日龄幼虫肠道内ame-miR-79的表达量显著下调,6日龄幼虫肠道内ame-miR-79的表达量极显著下调.ame-miR-79共靶向303个基因,涉及27个GO条目和179条KEGG通路.相较于mimic-NC组,靶基因细胞色素P450基因CYP450在mimic-miR-79组的4和5日龄幼虫肠道内均极显著下调表达,而在6日龄幼虫肠道内上调表达;靶基因fringe糖基化转移酶(fringe glycosyltransferase,FG)基因在4日龄幼虫肠道内下调表达,在5日龄幼虫肠道内显著下调表达,而在6日龄幼虫肠道内上调表达.相较于inhibitor-NC组,CYP450在inhibitor-miR-79组的4日龄幼虫肠道内极显著上调表达,在6日龄幼虫肠道内上调表达,而在5日龄幼虫肠道内下调表达;FG的表达水平在4日龄幼虫肠道内显著上调,在5和6日龄幼虫肠道内极显著上调.[结论]ame-miR-79在意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内真实存在;通过饲喂模拟物和抑制物能分别实现意大利蜜蜂工蜂幼虫肠道内ame-miR-79的有效过表达和敲减;ame-miR-79负调控意大利蜜