ZNF667通过抑制NF-κB信号通路改善椎间盘退变炎症损伤 - 钟华; 郭乐斌; 杨焱; 田琛俊; 刘富生; 郑博文 (中南大学学报（医学版）, 2024)
目的:随着老年化现象的加剧,椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)的发病率逐年增加.IDD的发病机制复杂,目前尚无有效的治疗手段.本研究旨在深入探究在IDD特别是髓核细胞炎症损伤过程中锌指蛋白667(zinc finger protein 667,ZNF667)的具体功能及其作用机制.方法:基于基因表达综合(gene expression omnibus,GEO)数据库中与IDD相关的数据集(GSE124272和GSE150408)筛选差异表达基因(differential expression genes,DEG),并将其中与基因转录调控密切相关的ZNF667作为目标基因.分析ZNF667基因在IDD相关数据集(GSE124272、GSE150408、GSE56081、GSE147383、GSE23130)中的表达情况.收集 3 例 IDD患者和 3 例外伤致椎体骨折患者(作为对照)的髓核组织,采用苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色对髓核组织进行病理学检测,并通过免疫组织化学技术(immunohistochemistry technique,IHC)检测ZNF667在髓核组织中的表达水平.进一步通过基因富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)揭示ZNF667潜在的作用机制.为进行体外验证,采用10 ng/mL白细胞介素(interleukin-1β,IL-1β)处理人原代髓核细胞以构建IDD细胞模型,并进一步转染ZNF667过表达质粒至细胞;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞培养上清液中炎症因子环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,实时聚合酶链反应检测细胞中ZNF667的mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测细胞中 ZNF667、髓分化因子 88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、P65 和磷酸化P65(phosphorylation-P65,p-P65)的蛋白质表达水平.结果:基于G