ASSAY AND SUBSTRATE FOR ARACHIDONOYL-SPECIFIC PHOSPHOLIPASE A2

• Main Authors: YU, LIN, DENNIS, EDWARD, A, REYNOLDS, LAURE, J
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 23.02.1995
• Edition: 6
• Subjects: ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAININGELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN,SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM; BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; ORGANIC CHEMISTRY; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

A non-radioactive, spectrophotometric, microtiter plate assay for human cystolic phospholipase A (cPLA) is disclosed. The assay utilizes a novel synthetic thiolphospholipid analog as a substrate. In one embodiment, the substrate is a phosphatidylcholine derivative with an arachidonoylthioester in the sn-2 position and an alkyl-ether or alkenyl-ether in the sn-1 position. The alkyl-ether or alkenyl-ether in the sn-1 position of the substrate ensures that the assay will only measure PLA activity and will not be complicated by metabolism of the lysophospholipid product by the enzyme's lysophospholipase activity. As a model of the invention, the figure shows the 8 steps used to synthesize the compound 1-Hexadecyl-2-arachidonylthio-2-deoxy-sn-glycero-3-phosphorylcholine from (R)-glycidol. L'invention concerne un titrage sur plaque de microtitrage non radioactive et spectrophotométrique servant à détecter la phospholipase A2 cystolique (cPLA2) chez l'homme. Le titrage met en application un nouvel analogue synthétique de thiolphospholipide en tant que substrat. Dans un mode de réalisation, le substrat est un dérivé de phosphatidylcholine comportant un arachidonylthioester en position sn-2 et un alkyle-éther ou alcényle-éther en position sn-1. L'alkyle-éther ou l'alcényle-éther en position sn-1 du substrat fait en sorte que le titrage mesurera uniquement l'activité de la PLA2 et ne sera pas mis en difficulté par le métabolisme du produit lysophospholipidique par l'activité de lysophospholipase de l'enzyme. Afin d'illustrer l'invention, la figure montre les huit étapes utilisées pour synthétiser le composé 1-hexadécyle-2-arachidonylthio-2-désoxy-sn-glycéro-3-phosphorylcholine à partir de (R)-glycidol.