DEVICES AND METHODS FOR DETERMINING NUCLEIC ACIDS USING DIGITAL DROPLET PCR AND RELATED TECHNIQUES

• Main Authors: ZHANG, Huidan, WEITZ, David
• Format: Patent
• Language: English; French
• Published: 22.07.2021
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; COMPOSITIONS THEREOF; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL ORENZYMOLOGICAL PROCESSES; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEICACIDS OR MICROORGANISMS; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

The present disclosure generally relates, in certain aspects, to droplet-based microfluidic devices and methods. In certain aspects, target nucleic acids contained within droplets are amplified within droplets in a first step, where multiple primers may be present. However, multiple primers may cause multiple target nucleic acids to be amplified within the droplets, which can make it difficult to identify which nucleic acids were amplified. In a second step, the amplified nucleic acids may be determined. For example, the droplets may be broken and the amplified nucleic acids can be pooled together and sequenced. As an example, new droplets may be formed containing the amplified nucleic acids, and those nucleic acids within the droplets amplified by exposure to certain primers. La présente invention concerne d'une manière générale, dans certains aspects, des dispositifs et des procédés microfluidiques à base de gouttelettes. Dans certains aspects, les acides nucléiques cibles contenus dans les gouttelettes sont amplifiés à l'intérieur des gouttelettes dans une première étape, où de multiples amorces peuvent être présentes. Cependant, de multiples amorces peuvent amener de multiples acides nucléiques cibles à être amplifiés à l'intérieur des gouttelettes, ce qui rend difficile l'identification des acides nucléiques qui ont été amplifiés. Dans une seconde étape, les acides nucléiques amplifiés peuvent être déterminés. Par exemple, les gouttelettes peuvent être brisées et les acides nucléiques amplifiés peuvent être rassemblés ensemble et séquencés. Comme exemple, de nouvelles gouttelettes peuvent être formées contenant les acides nucléiques amplifiés, et ces acides nucléiques à l'intérieur des gouttelettes amplifiés par l'exposition à certaines amorces.