PROCESS FOR PRODUCING EXOGENOUS PROTEIN IN THE MILK OF TRANSGENIC MAMMALS

• Main Authors: MARCELO CRISCUOLO, NAHUEL FERNANDEZ, CARLOS MELO, ANDRES BERCOVICH, NORBERTO JUDEWICZ, AIDA PRYNC
• Format: Patent
• Language: English; Spanish
• Published: 25.01.2010
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; ENZYMOLOGY; FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIREDCHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERSFROM A RACEMIC MIXTURE; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PERFORMING OPERATIONS; PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL; SEPARATION; SPIRITS; TRANSPORTING; VINEGAR; WINE

The invention relates to a non-human transgenic mammal that is useful for the production of a protein of interest that may be toxic to the mammal. The mammal is characterized by the fact that it is transgenic for the production in its milk of an inactive form of the protein of interest, preferably recombinant human insulin. It is not possible to produce recombinant human insulin in transgenic mammals since this molecule has a certain degree of biological activity in the mammals and could be toxic to the mammal. Thus, the invention involves cloning a genetic construct comprising a sequence encoding a modified human insulin precursor under the control of a beta casein promoter in an expression vector. It also involves transfecting the expression plasmid into fetal bovine somatic cells, such as fibroblasts, and enucleating bovine oocytes by nuclear transfer to generate transgenic embryos. The invention gives rise to transgenic bovine that will be able to produce a modified human insulin precursor in their mammary glands. Afterwards, the milk of these transgenic mammals can be collected, the modified human insulin precursor can be converted in vitro into recombinant human insulin, and the recombinant human insulin can be purified to homogeneity as a pure biopharmaceutical product. La invención se refiere a un mamífero transgénico no humano que es útil para la producción de una proteína de interés, que puede ser tóxica para el mamífero. El mamífero se caracteriza por el hecho de que es transgénico para la producción en su leche de una forma inactiva de la proteína de interés, de preferencia insulina humana recombinante. No es posible producir insulina humana recombinante en mamíferos transgénicos ya que esta molécula tiene un cierto grado de actividad biológica en los mamíferos y puede ser toxica para el mamífero. De esta manera, la invención involucra donar una construcción genética que comprende una secuencia que codifica un precursor de insulina humana modificado bajo el control de un promotor beta caseína en un vector de expresión. También involucra transfectar el plásmido de expresión en células somáticas bovinas fetales, tales como fibroblastos, y enuclear oocitos bovinos por transferencia nuclear para generar embriones transgénicos. La invención da lugar a un bovino transgénico que será capaz de producir un precursor de insulina humana modificado en sus glándulas mamarias. Posteriormente, la leche de estos mamíferos transgénicos puede recolectarse, el precursor de insulina humana modificado puede convertirse in vitro en insulina humana recombinante y la insulina humana recombinante puede purificarse a.