2- METHOD FOR PRODUCTION OF RECOMBINANT HUMAN IDURONATE 2-SULFATASE

• Main Authors: KAWASAKI ATSUKO, OOTSUKI KOUTA, SUGIMURA ATSUSHI, MIHARA KAZUTOSHI, HATANO YUUKICHI, KAMEI SHOICHIRO
• Format: Patent
• Language: English; Korean
• Published: 24.11.2017
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMES; ENZYMOLOGY; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; ORGANIC CHEMISTRY; PEPTIDES; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

대형의 스케일로, 고순도로, 만노오스 6-포스페이트 잔기를 갖는 재조합 인간 이듀로네이트 2-술파타아제 (rhI2S) 의 제조 방법이 개시된다. 상기 방법은 (a) 무혈청 배지에서 rhI2S-생성 포유동물 세포를 배양하는 단계, (b) 배양 상청액을 수집하는 단계, 배양 상청액을, (c) 양이온-교환 컬럼 크로마토그래피에 적용하는 단계, (d) 염료 친화성 컬럼 크로마토그래피에 적용하는 단계, (e) 음이온-교환 컬럼 크로마토그래피에 적용하는 단계, 및 (f) 포스페이트기에 대한 친화성을 갖는 물질을 고체 상으로서 이용하는 컬럼 크로마토그래피에 적용하는 단계, 및 (g) 겔 여과 컬럼 크로마토그래피에 적용하는 단계를 순서대로 포함한다. Disclosed is a method for production of recombinant human iduronate 2-sulfatase (rhI2S) (the 26th to 550th amino acids of SEQ ID NO: 10) in a large scale, with a high purity, and mannose 6-phosphate residues. The method comprises the steps of (a) culturing rhI2S (the 26th to 550th amino acids of SEQ ID NO: 10)-producing mammalian cells in a serum-free medium, (b) collecting culture supernatant, (c) subjecting the culture supernatant to cation-exchange column chromatography, (d) to dye affinity column chromatography, (e) to anion-exchange column chromatography, and (f) to a column chromatography employing as solid phase a material having affinity for phosphate group, and (g) to gel filtration column chromatography, in the order.