METHODE DE DETECTION, DE QUANTIFICATION ET DE DISCRIMINATION DES LEVURES BRETTANOMYCES SPP ET DES AUTRES LEVURES CONTENUES DANS UN SUBSTRAT LIQUIDE ORGANIQUE CONTENANT DES SUCRES FERMENTESCIBLES - DUBERNET, Matthieu, Pierre-Loup, Marie (2023)
L'invention concerne une méthode de détection, de quantification et de discrimination par cytométrie en flux des cellules des levures Brettanomyces spp contenues dans un substrat liquide organique lequel contient des sucres fermentescibles, selon laquelle on prélève un échantillon dudit substrat, éventuellement on le dilue, on ajoute dans ledit substrat éventuellement dilué au moins un premier fluorochrome apte à se lier à l'ADN des cellules mortes et/ou vivantes, on irradie ledit échantillon de manière à obtenir l'émission de fluorescence dudit premier fluorochrome et on irradie ledit échantillon également de manière à obtenir une émission de fluorescence dudit échantillon à 670 nm, on établit un histogramme bi paramétrique donnant pour chaque point l'intensité de la fluorescence due au premier fluorochrome couplée à l'intensité de la fluorescence émise à 670nm, on obtient ainsi au moins un premier nuage de points correspondant à une intensité de fluorescence émise et détectée à 670nm supérieure à celle détectée pour les autres points, on en déduit que les points dudit premier nuage correspondent aux cellules de Brettanomyces spp. The invention relates to a method for detecting, quantifying and differentiating by flow cytometry Brettanomyces spp yeast cells contained in an organic liquid substrate which contains fermentable sugars, whereby a sample of said substrate is taken, optionally diluted, at least a first fluorochrome capable of binding to the DNA of dead and/or live cells is added to said optionally diluted substrate, said sample is irradiated so as to obtain the fluorescence emission of said first fluorochrome and said sample is also irradiated so as to obtain a fluorescence emission of said sample at 670 nm, a biparametric histogram is plotted giving for each point the fluorescence intensity due to the first fluorochrome coupled with the fluorescence intensity emitted at 670 nm, at least a first point cloud is thus obtained corresponding to a greater fluorescence intensity emitted and detected at 670 nm than that detected for the other points, it is inferred therefrom that the points of said first cloud correspond to the Brettanomyces spp cells.