ΜΕΘΟΔΟΣ ΓΙΑ ΚΑΘΑΡΙΣΜΟ ΠΡΟΚΑΡΥΩΤΙΚΩΝ ΠΑΡΑΛΛΑΓΩΝ ΤΗΣ ΑΜΜΩΝΙΑΚΗΣ ΛΥΑΣΗΣ ΤΗΣ ΦΑΙΝΥΛΑΛΑΝΙΝΗΣ

• Main Authors: BELL, Sean, M, WENDT, Daniel, J, KAKKIS, Emil, D, OKHAMAFE, Augustus, O, LY, Kieu Y, ZECHERLE, G. Nick, FITZPATRICK, Paul A, VELLARD, Michel, Claude, ZHANG, Yanhong, MUTHALIF, Mubarack, ANTONSEN, Kris
• Format: Patent
• Language: Greek
• Published: 11.12.2019
• Subjects: BEER; BIOCHEMISTRY; CHEMISTRY; COMPOSITIONS THEREOF; CULTURE MEDIA; ENZYMOLOGY; HUMAN NECESSITIES; HYGIENE; MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; METALLURGY; MICROBIOLOGY; MICROORGANISMS OR ENZYMES; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL, OR TOILET PURPOSES; PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS; SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS ORMEDICINAL PREPARATIONS; SPIRITS; VINEGAR; WINE

Η παρούσα εφεύρεση παρέχει μία μέθοδο για καθαρισμό μιας Anabaena variabilis παραλλαγής αμμωνιακής λυάσης της φαινυλαλανίνης (AvPAL) με ελάχιστη συσσωμάτωση. Η μέθοδος περιλαμβάνει τα στάδια (a) της λύσης βακτηριακών κυττάρων τα οποία περιέχουν την AvPAL παραλλαγή με ομογενοποίηση για να παραχθεί ένα κυτταρικό λύμα˙ (b) της θέρμανσης του κυτταρικού λύματος στους 65°C για 30 έως 120 λεπτά˙ (c) της φυγοκέντρησης του θερμανθέντος κυτταρικού λύματος, όπου ένα υπερκείμενο το οποίο περιλαμβάνει την AvPAL παραλλαγή κατακρατείται˙ (d) της διήθησης του υπερκειμένου για απομάκρυνση ιζημάτων˙ και (e) του διαχωρισμού της AvPAL παραλλαγής από μολυσματικές πρωτεΐνες με διαδοχική χρωματογραφία σε μια στήλη ανταλλαγής ανιόντων (ΑΙΕΧ) ακολουθούμενη από μια στήλη υδρόφοβης αλληλεπίδρασης (HIC), όπου το προϊόν έκλουσης από την HIC στήλη περιλαμβάνει την AvPAL παραλλαγή, όπου τα κατάλοιπα κυστεΐνης στις θέσεις 503 και 565 της εν λόγω AvPAL παραλλαγής έχουν υποκατασταθεί με κατάλοιπα σερίνης (SEQ ID ΝΟ:11). Provided are compositions comprising a recombinant phenylalanine ammonia-lyase (PAL) derived from the bacterial species Anabaena variabilis, Nostoc punctiforme, Streptomyces maritimus, Streptomyces verticillatus, Soragium cellulosum, Nostoc tobacum, or Pseudomonas putida, or a biologically active fragment, mutant, variant or analog thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier. Further provided are such compositions of recombinant bacterial PAL and biologically active fragments, mutants, variants or analogs thereof for use in treating phenylketonuria hyperphenylalaninemia.