DESENVOLVIMENTO E PADRONIZAÇÃO DE UM ELISA INDIRETO PARA DIAGNÓSTICO DE MAEDI VISNA EM OVINOS

• Published in: Ciência animal brasileira Vol. 9; no. 1
• Main Authors: Tânia Valeska Medeiros Dantas, Suzana Aparecida Costa de Araújo, Raymundo Rizaldo Pinheiro, Maria Alzira do Carmo Aragão, Jean Berg Alves da Silva, Aracely Rafaelle Fernandes Ricarte, Adriana Lopes Ribeiro, Maria Fátima da Silva Teixeira
• Format: Journal Article
• Language: English
• Published: Universidade Federal de Goiás 01.04.2008
• Subjects: Medicina Veterinária Preventiva
• ISSN: 1518-2797; 1809-6891
• DOI: 10.5216/cab.v9i1.3677

O objetivo deste trabalho foi desenvolver e padronizar um ELISA indireto para diagnóstico de Maedi Visna (MV). Produziu-se o antígeno em sobrenadantes de cultivo celular de membrana sinovial caprina (MSC) inoculado com o Maedi Visna Vírus (MVV) cepa K1514, que passou por ciclos de congelamento e descongelamento, sendo logo após clarificado por centrifugação a 3.000 g por 40 minutos A suspensão clarificada foi precipitada por PEG 8000, centrifugada a 12.000 g por 60 minutos, o pellet ressuspendido em TNE (Tampão Tris-HCl, NaCl, EDTA) e ultracentrifugado a 42.000 g por 105 minutos em colchão de sacarose, e ressuspendido em PBS contendo phenylmethylsulphonyl fluoride (PMSF). Realizou-se o ELISA em microplacas de 96 poços, incubadas por 1h a 37 ºC, utilizando-se como revelador o-phenylenediamine (OPD). Para a comparação entre os testes de ELISA e AGID, utilizaram-se 175 amostras de soros. A concentração ótima do antígeno foi a de 2 µg/mL e a melhor diluição dos soros, controles e testes de 1:100. O ELISA detectou um maior número de positivos (40) que o AGID (11), apresentando uma sensibilidade de 91%, especificidade de 82%. O ELISA promoveu uma melhor sensibilidade que o AGID. Embora sua especificidade tenha ficado abaixo do esperado, seu uso pode ser indicado como teste de diagnóstico de MVV.PALAVRAS-CHAVES: Diagnóstico sorológico, ELISA, lentivírus ovino, MaediVisna.