牦牛热休克蛋白70-12B基因（HSPA12B）的克隆及其在体外受精胚胎中的表达 - 吕鹏 潘阳阳 崔燕 何翊闳 刘鹏刚 李秦 郑红飞 樊江峰 余四九 (农业生物技术学报, 2015)
为研究牦牛（Bos grunniens）热休克蛋白70-12B基因（heat shock 70 kD protein-12B,HSPA12B）的序列特性及其在体外受精胚胎中的表达情况,本研究根据黄牛（Bos taurus）HSPA12B基因序列5＆#39;端和3＆#39;端的保守序列设计特异性引物,RT-PCR扩增之后通过基因克隆得到HSPA12B基因（GeneBank登录号：KR258751）,利用生物学信息软件对其进行生物学信息分析,并采用实时定量PCR（quantitative Real-time PCR,qRT-PCR）检测其在牦牛体外受精胚胎2-4细胞期、5-8细胞期、桑葚期、囊胚期4个不同时期胚胎中的表达水平.生物学信息分析结果显示,牦牛HSPA12B基因序列具有一个长705 bp的编码区,可编码234个氨基酸,其中丙氨酸（Ala）含量最高（10.3％）,天冬酰胺（Asn）含量最少（0.9％）;同源性和系统进化树分析显示,牦牛HSPA12B基因与黄牛HSPA12B的同源性最高,为99.5％,表明HSPA12B在进化中具有高度保守性;编码产物无信号肽,为非跨膜蛋白,不属于分泌蛋白,整体表现为亲水性.qRT-PCR检测结果显示,HSPA12B在牦牛体外受精2-4细胞期胚胎、5-8细胞期胚胎、桑椹胚和囊胚中均有表达;HSPA12B在2-4细胞期胚胎中的相对表达量分别是在5-8细胞期胚胎、桑椹胚和囊胚中相对表达量的14.814 8、4.269 9和40.485 8倍;HSPA12B在2-4细胞期胚胎中的相对表达量,均与在5-8细胞期胚胎、桑椹胚和囊胚中的相对表达量差异性极显著（P＜0.01）.本研究提示,HSPA12B在牦牛体外受精胚胎的发育过程中非常重要,可能起着抑制细胞凋亡,延缓细胞衰老,调控胚胎早期发育的作用.