人苯丙氨酸羟化酶突变体p.R243Q、p.R241C和p.Y356X的体外表达及功能研究 - 庞永红; 高翔羽; 袁振亚; 黄辉; 王增芹; 彭磊; 李逸群; 刘杰; 刘冬; 陈桂荣 (中国当代儿科杂志, 2024)
目的 分析3种苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)突变体(p.R243Q、p.R241C和p.Y356X)的体外表达,确定3种突变体的致病性.方法 利用生物信息学技术预测PAH突变体对PAH蛋白结构和功能的影响.构建相应的PAH突变型质粒,在人胚胎肾细胞HEK293T中进行表达,采用定量逆转录聚合酶链反应检测3种PAH突变体的mRNA表达水平,利用蛋白质印迹法与酶联免疫吸附试验检测突变体的PAH蛋白表达水平.结果 生物信息学分析预测结果显示,3种突变体均具备致病性.突变体p.R243Q和p.R241C质粒在HEK293T细胞中的mRNA表达水平与野生型类似(P>0.05),而p.Y356X突变体质粒的mRNA表达水平明显下降(P<0.05).3种突变体PAH蛋白的表达水平与野生型相比均显著降低(P<0.05).p.R241C和p.Y356X的细胞外PAH蛋白浓度较野生型降低(P<0.05),p.R243Q与野生型相比差异无统计学意义(P>0.05).结论 p.R243Q、p.R241C和p.Y356X降低真核细胞中PAH蛋白的表达量,其中p.R241C和p.Y356X还影响PAH蛋白的功能,这3种PAH突变体均为致病性突变.[中国当代儿科杂志,2024,26(2):188-193]