人参皂苷20(S)-Rg3通过抑制DNMT3A介导的启动子甲基化促进卵巢癌细胞中抑癌基因VHL的表达

目的 明确人参皂苷20(S)-Rg3促进卵巢癌细胞抑癌基因von Hippel-Lindau(VHL)表达的机制.方法 Real-time PCR和Western blotting检测20(S)-Rg3处理前后卵巢癌细胞SKOV3中的VHL、DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的mRNA和蛋白水平.Real-time PCR检测甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理卵巢癌细胞SKOV3前后VHL的mRNA水平变化.甲基化特异性PCR(MSP)检测20(S)-Rg3单纯处理组和20(S)-Rg3处理且过表达DNMT3A组的VHL基因启动子区的甲基化水平...

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Published in南方医科大学学报 Vol. 41; no. 1; pp. 100 - 106
Main Authors 王莉洁, 韩曦, 郑霞, 周园园, 侯惠莲, 陈葳, 李旭, 赵乐
Format Journal Article
LanguageChinese
Published 兰州大学第二医院妇科,甘肃兰州730030%陕西省人民医院妇产科,陕西西安710068%浙江大学医学院附属第二医院妇产科,浙江杭州310009%西安交通大学第一附属医院妇产科,陕西西安710061%西安交通大学第一附属医院病理科,陕西西安710061%西安交通大学第一附属医院检验科,陕西西安710061%西安交通大学第一附属医院转化医学中心,陕西西安710061 26.01.2021
西安交通大学第一附属医院转化医学中心,陕西西安710061
西安交通大学第一附属医院陕西省肿瘤精准医学重点实验室,陕西西安710061
Subjects
卵巢癌
VHL
甲基化
人参皂苷
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ISSN1673-4254
DOI10.12122/j.issn.1673-4254.2021.01.14

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Abstract 目的 明确人参皂苷20(S)-Rg3促进卵巢癌细胞抑癌基因von Hippel-Lindau(VHL)表达的机制.方法 Real-time PCR和Western blotting检测20(S)-Rg3处理前后卵巢癌细胞SKOV3中的VHL、DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的mRNA和蛋白水平.Real-time PCR检测甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理卵巢癌细胞SKOV3前后VHL的mRNA水平变化.甲基化特异性PCR(MSP)检测20(S)-Rg3单纯处理组和20(S)-Rg3处理且过表达DNMT3A组的VHL基因启动子区的甲基化水平,并检测VHL的mRNA和蛋白表达水平.免疫组化检测课题组前期获得的20(S)-Rg3处理组及对照组的裸鼠皮下移植瘤组织中VHL和DNMT3A的蛋白表达.结果 20(S)-Rg3处理后,卵巢癌细胞SKOV3中VHL的mRNA水平升高到阴性对照细胞的2倍以上,蛋白水平亦上调(P＜0.05);DNMT3A的mRNA水平和蛋白水平均下降(P＜0.05),DNMT3B的mRNA水平略有升高但蛋白水平无明显变化(P＞0.05),DNMT1的mRNA和蛋白水平均无变化(P＞0.05).2 μmol/L和5 μmol/L的5-Aza-CdR处理后,SKOV3细胞的VHL mRNA水平升高到阴性对照细胞的3倍以上(P＜0.05)020(S)-Rg3使VHL基因启动子区的甲基化水平降低(P＜0.05),在20(S)-Rg3处理的同时过表达DNMT3A,则VHL基因启动子甲基化水平再次升高,同时VHL mRNA和蛋白水平均降低(P＜0.05).免疫组织显示,相对于对照组,20(S)-Rg处理组的裸鼠皮下移植瘤组织中VHL的表达上上调、DNMT3A的表达下调.结论 20(S)-Rg3通过抑制DNMT3A介导的启动子甲基化而促进卵巢癌细胞中VHL的表达.
AbstractList 目的 明确人参皂苷20(S)-Rg3促进卵巢癌细胞抑癌基因von Hippel-Lindau(VHL)表达的机制.方法 Real-time PCR和Western blotting检测20(S)-Rg3处理前后卵巢癌细胞SKOV3中的VHL、DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的mRNA和蛋白水平.Real-time PCR检测甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理卵巢癌细胞SKOV3前后VHL的mRNA水平变化.甲基化特异性PCR(MSP)检测20(S)-Rg3单纯处理组和20(S)-Rg3处理且过表达DNMT3A组的VHL基因启动子区的甲基化水平,并检测VHL的mRNA和蛋白表达水平.免疫组化检测课题组前期获得的20(S)-Rg3处理组及对照组的裸鼠皮下移植瘤组织中VHL和DNMT3A的蛋白表达.结果 20(S)-Rg3处理后,卵巢癌细胞SKOV3中VHL的mRNA水平升高到阴性对照细胞的2倍以上,蛋白水平亦上调(P＜0.05);DNMT3A的mRNA水平和蛋白水平均下降(P＜0.05),DNMT3B的mRNA水平略有升高但蛋白水平无明显变化(P＞0.05),DNMT1的mRNA和蛋白水平均无变化(P＞0.05).2 μmol/L和5 μmol/L的5-Aza-CdR处理后,SKOV3细胞的VHL mRNA水平升高到阴性对照细胞的3倍以上(P＜0.05)020(S)-Rg3使VHL基因启动子区的甲基化水平降低(P＜0.05),在20(S)-Rg3处理的同时过表达DNMT3A,则VHL基因启动子甲基化水平再次升高,同时VHL mRNA和蛋白水平均降低(P＜0.05).免疫组织显示,相对于对照组,20(S)-Rg处理组的裸鼠皮下移植瘤组织中VHL的表达上上调、DNMT3A的表达下调.结论 20(S)-Rg3通过抑制DNMT3A介导的启动子甲基化而促进卵巢癌细胞中VHL的表达.
Author 王莉洁
李旭
侯惠莲
陈葳
赵乐
韩曦
郑霞
周园园
AuthorAffiliation 西安交通大学第一附属医院转化医学中心,陕西西安710061;兰州大学第二医院妇科,甘肃兰州730030%陕西省人民医院妇产科,陕西西安710068%浙江大学医学院附属第二医院妇产科,浙江杭州310009%西安交通大学第一附属医院妇产科,陕西西安710061%西安交通大学第一附属医院病理科,陕西西安710061%西安交通大学第一附属医院检验科,陕西西安710061%西安交通大学第一附属医院转化医学中心,陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院陕西省肿瘤精准医学重点实验室,陕西西安710061
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CHEN Wei
ZHENG Xia
ZHOU Yuanyuan
HAN Xi
HOU Huilian
WANG Lijie
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