天麻素通过调节CCR5/AKT信号传导缓解新生小鼠缺血缺氧后小胶质细胞介导的炎症反应 - 石金沙; 张皓南; 张幸霖; 石浩龙; 左涵珺; 郭涛; 王朝; 余航; 李娟娟 (南方医科大学学报, 2024)
目的 研究天麻素(GAS)通过CCR5/AKT信号对新生小鼠缺血缺氧(HIBD)后小胶质细胞介导炎症反应的影响.方法 选用36只10 d龄的C57BL/6J小鼠,随机分为假手术组(Sham)、缺血缺氧模型组(HIBD)、缺血缺氧+天麻素治疗组(HIBD+GAS),12只/组.模型组和治疗组均行左颈总动脉分离并结扎,1 h后置于缺氧环境中40 min后放回母笼,治疗组在术前1 h、缺氧后2 h及缺氧后12 h腹腔注射剂量为100 mg/kg的GAS.体外培养BV2小胶质细胞验证天麻素对CCR5/AKT及炎症因子TNF-α、IL-1β的影响,将其分为:对照组(Control)、氧糖剥夺组(OGD)、OGD+GAS处理组(OGD+GAS)、GAS处理组(GAS);为进一步验证CCR5拮抗剂Maraviroc(M)的作用以及其与GAS联合干预的作用,将细胞分为:Control组、(OGD)组、M组、OGD+M组、OGD+M+GAS组.Control组用高糖培养基正常培养,含GAS组用 GAS 0.34 μmol/L处理 1 h,含M组用Maraviroc 10 μmol/L处理1 h,最后将含OGD组均更换为无糖培养基并置于缺氧小室2 h以构建OGD模型.通过Western blotting检测CCR5、AKT、p-AKT、TNF-α、IL-1β的蛋白表达,免疫荧光双标染色检测新生小鼠胼胝体CCR5以及BV2小胶质细胞中CCR5和p-AKT的表达变化.结果 与Sham组相比,HIBD组中CCR5、TNF-α表达显著增加,p-AKT表达显著减低(P<0.05,0.01或0.001),GAS治疗后逆转了上述结果(P<0.05或0.01).与Sham组相比,HIBD组中新生小鼠胼胝体区小胶质细胞标记物IBA1及CCR5的荧光强度明显升高,其共表达增加,而GAS干预后IBA1及CCR5的荧光强度显著降低,共表达减少.与Control组相比,OGD组CCR5、TNF-α、IL-1β表达显著增加,p-AKT表达显著减少(P<0.05,0.01或0.001);GAS或Maraviroc治疗后,逆转了上述结果(P<0.05或0.01).OGD+M组与OGD+M+GAS组比较,差异无统计学意义.结论 GAS可能通过靶向CCR5激活AKT的磷酸化表达水平,抑制炎症因子的表达,发挥神经保护作用.